Fél SIM alapozás, előkészítés és felhasználás

az fél SIM Ez egy félszilárd és differenciál agar, amelyet kifejezetten bizonyos baktériumok, főként az Enterobacteriaceae család azonosítására terveztek. Tripteint, peptont, vas-szulfátot, ammónium-szulfátot, nátrium-tioszulfátot és agart tartalmaz.

Ez a közeg lehetővé teszi három fontos vizsgálat végrehajtását: a hidrogén-szulfid előállítását (H)₂S), indolképződés és motilitás, így a SIM rövidítés. Nagy hasznossága miatt nem lehet hiányozni egy bakteriológiai laboratóriumban.

Más közegektől eltérően ez félig szilárdnak kell lennie, hogy bizonyos baktériumok mozgási kapacitása kimutatható legyen. Ebben az értelemben ez a teszt nagyon jól működik az Enterobacteriaceae esetében, de nem a Gram-negatív, nem erjedő bacillákban, ahol előnyben részesítenek más módszerek, például a függőben lévő cseppek használatát..

A SIM-közeg lehetővé teszi bizonyos baktériumokat jellemző egyes tulajdonságok megkülönböztetését másokkal szemben. Például Escherichia coli ez H₂S (-), Indol (+) és motilitás (+), míg Proteus mirabilis ez H₂S (+), indol (-), motilitás (+).

index

• 1 Alapítvány
  • 1.1 Áramforrás
  • 1.2. A hidrogén-szulfid előállítása
  • 1.3 Indolképződés
  • 1.4 Motilitás
• 2 Előkészítés
  • 2.1 Fél SIM
  • 2.2 Kovac-reagens
  • 2.3 Erlich reagens
• 3 Használat
  • 3.1
• 4 Minőségellenőrzés
• 5 Korlátozások
• 6 Referenciák

alapítvány

Ez egy olyan táptalaj, amely differenciáltnak tekinthető, mert felhasználása megkülönbözteti a hidrogén-szulfidot termelő mikroorganizmusokat azoktól, amelyek nem; kiemeli azokat is, amelyek indolt képeznek a triptofánból azokból, akik nem képezik azt, és végül megkülönbözteti a mozdulatot a mozdulatlan baktériumoktól..

Áramforrás

Bármely tenyésztőközegként olyan elemeket tartalmaz, amelyek biztosítják a szükséges tápanyagokat, hogy a nem igényes mikroorganizmusok fejlődhessenek. Ezeket az elemeket a peptonok és a tripteína képviseli.

A mikroorganizmus kialakulása a környezetben elengedhetetlen ahhoz, hogy megfigyelhessük a közeg által értékelt jellemzők jelenlétét vagy hiányát.

A hidrogén-szulfid előállítása

A SIM rövidítés S betűje hidrogén-szulfid előállítására utal (H₂S). A hidrogén-szulfid képződésére képes baktériumok a nátrium-tioszulfát ként tartalmaznak.

A H kialakulása után₂S - színtelen gázok - ez reagál a közegben jelenlévő vas-sóval, amely vas-szulfidot képez, jól látható (fekete csapadék). A H nem képződő baktériumok₂S, hagyja az eredeti szín közepét (bézs).

A fekete csapadék jelenléte akadályozhatja a mozgékonyság értelmezését. Ismeretes azonban, hogy a H-termelõ enterobaktériumok többsége₂S pozitív motilitás, például Salmonella, Proteus és Citrobacter. Ezen túlmenően a szinte a teljes táptalajt lefedő fekete csapadék pozitív motilitást sugall.

Indol képzés

A SIM rövidítés második betűje az "I", amely az indol képződését jelenti.

Ebben az értelemben a tripteína a tápanyagforrás mellett egy másik alapvető funkciót is teljesít. Ez a pepton gazdag egy triptofán nevű aminosavban, ezért megmutatja a triptofanázt termelő baktériumokat..

Ez az enzim felelős az aminosav triptofán kivágásáért, következésképpen az indol (színtelen anyag), piruvinsav és ammónium képződésével..

Ezért szükséges ennek a reakciónak a bemutatásához feltáró anyagot (Ehrlich reagens vagy Kovac reagens) adni. Mindkettő reagál az indollal, egy gyűrű alakú vörösfukszia anyagot képezve az agar felületén. Ha a fuksziagyűrű megjelenik, az indol teszt pozitívnak tekinthető.

Az ilyen enzimet nem tartalmazó baktériumok nem képezik a gyűrűt, és negatív indol-tesztként értelmezik.

Fontos megjegyezni, hogy az indol-tesztnek az utolsó értelmezendőnek kell lennie, mivel a reagens hozzáadása után a közeg zavarossá válik, ami megnehezíti a mozgékonyság megjelenítését..

mozgékonyság

Végül a SIM szó „M” betűje a mozgékonyságot jelenti. Annak érdekében, hogy értékelni lehessen a mozgékonyságot, ez a közeg stratégiailag félszilárd, mivel ez a jellemző elengedhetetlen ahhoz, hogy megfigyelhessük, hogy van-e baktériummozgás. Azok a baktériumok, amelyek flagellával rendelkeznek, azok, amelyek ezt a pozitív tesztet adják.

Pozitív teszt lesz látható, amikor a kezdeti inokulumban és a körülötte lévő zavarosság figyelhető meg. Míg a nem mozgó baktériumok csak a kezdeti inokulum útvonalon fejlődnek ki.

előkészítés

Fél SIM

Mérjünk le 30 g dehidratált közeget, és oldjunk fel egy liter desztillált vízben. Az elegyet 5 percig állni hagyjuk, majd forrásig melegítjük, és gyakran addig keverjük, amíg teljesen fel nem oldódik..

A keveréket kémcsövekbe helyezzük pamut fedéllel és autoklávozzuk 121 ° C-on 15 percig. Távolítsa el a csőtartót az autoklávból, és hagyja, hogy függőleges helyzetben megszilárduljon, hogy a közeg egy blokk alakú legyen..

A tároláshoz hűtőszekrényben kell tartani, amíg azt fel nem használják. Az előkészített tápközeg végső pH-ja 7,3 ± 0,2 legyen.

A tápközeg beoltásának pillanatában szobahőmérsékleten kell lennie. A közeg színe bézs.

Kovac-reagens

Mérjünk 150 ml amil- vagy izoamil- vagy butil-alkoholt. (Használja a három említett egyiket).

10 g p-dimetil-amino-benzaldehidet oldunk. Ezután lassan 50 ml tömény sósavat adunk hozzá.

A használatra kész reagens színtelen vagy világos sárga. Ezt borostyán üvegben kell tartani, és hűtőszekrényben kell tárolni. Ne használja, ha sötétbarna színű; ami azt jelzi, hogy sérült. Ez a reagens előnyös az enterobaktériumok kezelésében.

Erlich reagens

Mérjünk be 2 g p-dimetil-amino-benzaldehidet, és 190 ml abszolút etil-alkoholban oldjuk és lassan keverjük össze 40 ml tömény sósavval. A Kovac-reagenst ugyanúgy kell tartani. Ehrlich-reagenst inkább nem erjedő és anaerob baktériumokhoz használnak.

alkalmazások

A SIM-tápközeget bakteriológiai laboratóriumokban használják. Előnye, hogy ugyanabban a csőben három lényeges jellemző figyelhető meg az Enterobacteriaceae azonosításában.

beültetett

A tápközeg megfelelő vetésének módja a tű használatával történik, amellyel a vizsgálandó tiszta kolónia egy részét felvesszük és a tápközeg közepébe helyezzük függőlegesen. Egyetlen tolóerőre van szükség. A szúrás nem érheti el a cső alját, a helyes dolog a mélység csak kétharmadának lefedése.

Nem ajánlatos megismételni az inokulumot, mivel ez a pozitív motilitás hamis értelmezéséhez vezethet. A beoltott tápközeget aerobiosisban inkubáljuk 37 ° C-on 24 órán át.

Megállapítottam, hogy mennyi idő figyelhető meg, ha H-t termelnek vagy nem₂S és motilitás olvasható. Végül az indolt kimutatjuk, 3-4 csepp Ehrlich-et vagy Kovac-reagenst adunk hozzá, óvatosan összekeverjük és értelmezzük.

Minőségellenőrzés

Sterilitás kontrollként egy vagy két csövet inokulálunk be sütőben 37 ° C-on 24 órán át. Várható, hogy ezután nem lesz növekedés vagy színváltozás.

Minőségellenőrzésként hitelesített ismert törzsek használhatók, például: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

A várt eredmények: Escherichia coli H₂S negatív, indol és pozitív motilitás, Enterobacter aerogenes csak pozitív mozgékonyság, Salmonella typhimurium H₂S és pozitív motilitás negatív indollal. Proteus vulgaris mind pozitív, míg Klebsiella pneumoniae és Shigella sonnei mind negatív.

korlátozások

-Néhány törzs Morganella morganii, más törzsek között a melanin termelése miatt barnás pigment keletkezhet ebben a közegben, ezt nem szabad összekeverni a vas-szulfid csapadékával. A tapasztalatlan szakembereknél ez a helyzet hamis pozitív eredményeket hozhat létre a H teszt értelmezésében₂S.

-A szigorú aerob baktériumok csak a cső felületén fognak növekedni, ami megnehezíti a mozgékonyság értelmezését.

referenciák

1. BD laboratóriumok BBL SIM közepes. 2008. Elérhető: bd.com
2. Neogen Laboratories SIM közepes. Rendelkezésre áll: foodsafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM közepes. 2009. Elérhető: http://f-soria.es
4. Brizuela-Lab laboratórium SIM közepes. Elérhető: .brizuela-lab.com
5. Laboratóriumok Britania. SIM közepes. 2015. Elérhető: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.