Alapítvány laktoszádó leves, elkészítés és felhasználás

az laktózleves egy folyékony, nem szelektív tenyésztő tápközeg, amelyet főként elő-dúsító közegként használnak a Salmonella törzsek elkülönítésében a feldolgozott élelmiszereken, tejtermékeken vagy vízen végzett mikrobiológiai elemzéssel. Ezt ajánlja az élelmiszerek mikrobiológiai előírásaival foglalkozó nemzetközi bizottság (ICMPF)..

A tápközeg zselatin, húskivonat és laktóz enzimatikus emésztését tartalmazza, amelyek a baktériumok növekedéséhez szükséges anyagok. Ezenkívül a laktóz egy fermentálható szénhidrát, így néhány coliform a gáztermeléssel képes felosztani.

Ezért az amerikai közegészségügyi szövetség (APHA) a laktóz-táptalajt ajánlja a teljes és széklet coliform baktériumok feltételezett vizsgálatára, amely kiváló alternatívát jelent a lauril-szulfát triptóz-táptalaj helyettesítésére a legvalószínűbb szám (NMP) standard technikájában. ), amelyet élelmiszer-, tej- és felszíni vizek, földalatti, szabadidős, háztartási és ipari hulladékok mikrobiológiai elemzésére használnak.

index

• 1 Alapítvány
• 2 Előkészítés
• 3 Használat
  • 3.1. Előzetes dúsítás
  • 3.2 A teljes és széklet koliformák elemzése
• 4 A közeg minőségellenőrzése
• 5 Referenciák

alapítvány

Bizonyos minták mikrobiológiai elemzéséhez elengedhetetlen az előzetes dúsítás lépése, hogy képes legyen egy olyan specifikus mikroorganizmus visszanyerésére, amely nagyon kis mennyiségben vagy kedvezőtlen körülmények között, ami sérti vagy minimalizálja annak életképességét.

Ilyen például a száraz és feldolgozott élelmiszerek esetében, amelyek esetleg szennyezettek Salmonellas sp. Ezekben az esetekben, ha a baktériumok jelen vannak, fizikai és kémiai bánásmódot szenvedtek el a termék gyártási folyamata során..

Olyan módon, hogy a mikroorganizmusok olyan hátrányos tényezőknek vannak kitéve, mint a dehidratáció, a gátló vagy mérgező termékek expozíciója, valamint más baktériumok nagyobb mennyiségben jelenléte által okozott átfedés..

Ebben az értelemben a laktózleves javító hatást fejt ki a mikroorganizmus sérült struktúráira, ami azt eredményezi, hogy helyreállítható és reprodukálható oly módon, hogy az észlelhető legyen..

Hasonlóképpen, a laktóz-tápoldat képes arra, hogy hígítsa a gátló anyagokat, amelyek befolyásolhatják annak életképességét, lehetővé téve annak fejlődését. Ezen túlmenően a laktóz táplálék összetétele stratégiai jelentőségű a növekedés elősegítésére Salmonella sp más mikroorganizmusok fölött.

A végső azonosításhoz azt a végső termény egyéb módjaira kell ápolni.

Másrészt a közeg összetétele lehetővé teszi a gázt termelő laktóz-fermentáló mikroorganizmusok kimutatását is.

előkészítés

Egy liter laktóz-táptalaj előállításához 13 g dehidratált táptalajt mérünk, és 1000 ml desztillált vízben oldjuk..

A közeg vízben való feloldásához segíthet egy kicsit felmelegíteni az oldatot, de nem túl sok..

Miután homogén, az oldatot az alábbiak szerint állítjuk elő: ha a húsleveset coliformák keresésére használják, akkor egy kémcsövekkel ellátott állványt készítenek, és egy Durham erjesztőcsövet fejjel lefelé helyeznek be.

A Durham-cső nagyon fontos részlet, mert lehetővé teszi a gázképződés észlelését, értékes adatokat a coliformák keresése során..

Amikor a csövek készen állnak, 10 ml laktóz-táptalajt adagolnak be őket, ami elegendő ahhoz, hogy a teljes Durham-csövet lefedje..

Ha a laktóz-táptalajt előzetesen dúsító táptalajként használják, akkor nem szükséges Durham fermentációs csövet helyezni. Ebben az esetben nagyobb mennyiségű közeg (225 ml) szükséges, amelyet 500 ml-es palackokban, széles szájban és hőálló, csavaros kupakkal kell kiszolgálni..

Ezt követően a csöveket vagy lombikokat 121 ° C-on 15 percig az autoklávba vittük.

A tápközegnek 6,9 ± 0,2 végső pH-n kell maradnia 25 ° C-on.

A borokat hűtőszekrényben tárolják, amíg fel nem használják.

Használat előtt a húsleveset szobahőmérsékleten kell temperálni.

Másrészt a laktóz-táptalajt is előállíthatjuk kettős koncentrációban.

Néhány laboratórium pH-indikátorként a laktóz-táptalajhoz bróm-krezolt lila-t ad, hogy bemutassa azokat a csöveket, ahol a színváltozás következtében laktóz-fermentáció történt. Ebben az esetben a húsleves lila színű, és ha a fermentáció sárgára változik.

alkalmazások

Mikrobiológiai laboratóriumokban a laktóz-táptalajt széles körben használják viszonylag olcsó közegként, amely megbízható és gyors eredményeket kínál (24-48 óra).

Alkalmazható a teljes és széklet koliformák vízben és ételben történő elemzésére, vagy a salmonellára előkészítő táptalajként..

Preenrichment

Az előzetes dúsítás a minta dúsítását megelőző lépés, amely jelentősen javítja a Salmonella nemzetségbe tartozó baktériumok visszanyerését feldolgozott élelmiszerekben..

Ehhez a szilárd élelmiszer (25 gramm) vagy a folyadék (25 ml) mintát 225 ml laktóz-táptalajba beoltjuk, és 24-48 órán át inkubáljuk. Ezt követően a szelenit cisztin-táptalajt vagy a tetrathionát-táptalajt gazdagított tápközegben tenyésztjük. Ezután átmegy a XLD és SS szelektív médiához.

A teljes és széklet koliformák elemzése

Kiváló eszköz a székletszennyezés indikátoraként.

Ezért a laktóz-táptalaj ideális a coliformos vizsgálat feltételezett fázisához a legvalószínűbb szám módszerrel.

Olyan minták esetében, amelyekben nagy mennyiségű coliformális gyanú áll fenn, kisebb mennyiségű coliformát inokulálunk (1 ml), míg olyan minták esetében, amelyeknél kisebb mennyiségű coliformok gyanúja áll fenn, több mintát veszünk be (10 ml)..

Az analízishez 10 hígítás készül^-1, 10^-2, 10^-3, 3-5 csöves akkumulátor kialakítása minden egyes alkalmazott koncentrációhoz.

Minden hígításból ugyanaz a térfogat a laktóz-táptalajokba kerül.

A csöveket 24 órán át inkubáljuk. A negatív táptalajokat 24 órán át inkubáljuk.

Az eredmények értelmezése két jellemző figyelembevételével történik: az első a zavarosság jelenléte vagy hiánya, és mivel ez a közeg nem tartalmaz pH-jelzőt, nem lesz színváltozás..

A második a gáz előállítása. A gázt könnyen demonstrálják a Durham-csőben, egy vagy több légbuborék megjelenésével.

Pozitívnak tekinthető, ha mindkét jellemző figyelhető meg, azaz a zavarosság a gáztermeléssel. A pozitív csöveket újra be kell táplálni a megerősítő táptalajba (Brothiant Green 2% Bile és EC húsleves).

A közeg minőségellenőrzése

- A közeg előkészítése során fontos, hogy ne felejtsük el elhelyezni a Durhams-csöveket, ha ugyanez a cél a koliformák vizsgálata..

- Sterilizálás előtt ne melegítse túl a közeget.

- A sterilizálás előtt a kémcsövekbe szétosztjuk, soha ne utána.

- Ne használja, ha a tápközegnek több mint 3 hónapja van.

- Ne használja, ha bármilyen változást észlel a közeg szokásos jellemzőiben.

- A laktóz-táptalaj egy tételének elkészítésekor tesztelje annak minőségét a következő nevű törzsek beültetésével Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii és Klebsiella pneumoniae. Nagyon jól nőnek, gáztermeléssel (pozitív kontroll).

- Ez magában foglalhatja a következőket: Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimuriumra vagy Enterococcus faecalis, jól növekszik, de gáztermelés nélkül (negatív kontroll).

- Meg kell jegyezni, hogy a dehidratált közeg eredeti színe bézs és a közeg nagyon tiszta és átlátszó sárga. Ha a szín vagy a megjelenés megváltozik, ugyanaz lehet a romlás.

referenciák

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biológia és környezeti mikrobiológia. (2013) 1. kiadás. Cartagenasi Egyetem, Kolumbia.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B és Velázquez O. (2009). Az élelmiszerek mikrobiológiai elemzésének módszerei. 2nd ed. Kémiai Kar, UNAM. Mexikó.
3. Laboratóriumok Conda Pronadisa. 2017. Laktózleves kettős koncentráció (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. A coliform baktériumok Xochimilco tó üledékéből származó extrakciós technikák összehasonlítása. Rev. argent. Microbiol.  2013 45 (3): 180-184. Elérhető: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Központi, Cordillera és Fővárosi Önkormányzatok megyei artézi kutak vizeinek mikrobiológiai minőségének meghatározása. Mem. Inst. Investig. Cienc. egészség 2013 11 (1): 5-14. Elérhető: scielo.iics.