EK húsleves alapítvány, előkészítés és felhasználás

az EC húsleves vagy húsleves Escherichia coli Szelektív folyékony tápközeg. Ezt a táptalajt a teljes és a széklet coliformák számlálására a standard módszerek ajánlják, a legvalószínűbb szám (NMP) módszerével a víz- és élelmiszermintákban, ahol a fő hatóanyag a következő: Escherichia coli.

Az EK húsleves tripteint, laktózt, epesókat, dikálium-foszfátot, monokálium-foszfátot, nátrium-kloridot és vizet tartalmaz. A képlet stratégiailag úgy van kialakítva, hogy elősegítse a teljes és széklet koliformák növekedését, és megakadályozza más kísérő mikroorganizmusok fejlődését..

A baktérium Escherichia coli a vízben és élelmiszerforrásokban szennyező anyagként jelenlévő fő széklet koliform, ami jelentős gyomor-bélrendszeri hatásokat okoz.

Meg kell jegyezni, hogy számos szerotípus létezik Escherchia coli; köztük említhetjük az enterohemorrhagiás (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteropatogén (EPEC), enterotoxigén (ETEC) és enteroaggregatív (EAEC).

Ez azt jelenti, hogy képes arra, hogy lehetővé tegye mindegyikük fejlődését, de anélkül, hogy megkülönböztetné őket. Ehhez további vizsgálatokat kell végezni.

A víz és az élelmiszer mikrobiológiai vizsgálata a legvalószínűbb számmal (NMP) a teljes és széklet coliformák keresésére egy olyan protokoll, amely több fázisban van; feltételezett fázis, megerősítő fázis és befejezési fázis. Az EK-táptalajt a megerősítő fázisban használják.

index

• 1 Alapítvány
  • 1.1 EC húsleves
  • 1.2. A novobiocinnal módosított EC-húsleves
• 2 Előkészítés
  • 2.1 EC-húsleves
  • 2.2. A novobiocinnal módosított EC-húsleves
• 3 Használja
  • 3.1 A teljes és széklet koliformák elemzése
• 4 Minőségellenőrzés
• 5 Ajánlások
• 6 Referenciák

alapítvány

EC Broth

Az EK-tápközeg alapja a szükséges táplálkozási elemek biztosítása az összes és széklet coliformák optimális fejlődéséhez, ahol a baktérium szerepel. Escherichia coli.

Ezeket a táplálkozási elemeket a triptein biztosítja, ami kiváló peptid- és aminosavforrás. Ezenkívül tartalmaz laktózt is, amely egy fermentálható szénhidrát, amely energiát biztosít és lehetővé teszi, hogy megmutassák, ha a baktériumok gázokat termelnek.

Másrészt a közeg epe-sókat tartalmaz, amelyek szelektív jellegűek, mivel gátolja a mintában jelenlévő Gram-pozitív mikroorganizmusok növekedését..

Hasonlóképpen, a dikálium-foszfát és a monokálium-foszfát pH-kiegyensúlyozó rendszerként működik. Ez a rendszer azért szükséges, mert a táptalajban levő laktóz mikroorganizmusok fermentálásakor hajlamos savanyítani a táptalajt, de ezt kompenzálja a foszfátsók..

Ezért ezek az elemek elengedhetetlenek, mert a kontrollálatlan savasság befolyásolhatja a kért mikroorganizmusok megfelelő fejlődését.

A nátrium-klorid részlegesen ozmotikusan stabilizálja a táptalajt, míg a víz a jelenlévő oldott oldószer, és biztosítja a folyadék konzisztenciáját a közeghez..

Az EC húsleveset módosították novobiocinnal

Okrend és Rose különféle EC-húsleveseket hozott létre, amelyeket a novobiocinnal módosított EC húslevesnek neveztek. A módosítás az epesók sóinak koncentrációjának csökkentését és 20 mg / dl novobiocin adagolását tartalmazza.

Ez a módosítás kedvez a törzsek helyreállításának Escherichia coli enterohemorrhagiás (O157: H7).

Ez a bakteriális szerotípus súlyos vérzéses colitist okoz, ami hemolitikus urémiás szindrómát (HUS) okozhat; ami viszont akut veseelégtelenséget okozhat, magas halálozási arány mellett, amely az időseknél akár 50% -ot is elérhet.

A baktérium által a szennyezett élelmiszerek fogyasztása miatt évente előidézett megbetegedések és halálozások miatt az Egyesült Államok Mezőgazdasági Minisztériuma (USDA) széles körben ajánlja ezt az eszközt..

előkészítés

EC Broth

Mérjünk be 37,4 g dehidratált közeget, és 1 liter desztillált vízben oldjuk. Az elegyet 5 percig hagyjuk nyugodni. Ezt követően egy hőforrásban feloldódnak a feloldódás gyakran.

A feloldódás után az előzőleg Durham-csővel kondicionált kémcsövekbe kerül. Sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 15 percig.

A közeg pH-ja 6,9 ± 0,2 legyen. A dehidratált közeg színe bézs színű és világos borostyánszínű.

A borokat hűtőszekrényben tárolják, amíg fel nem használják. A felhasználás időpontjában a leveseket szobahőmérsékleten kell tartani.

Másrészről az EK-húsleves is előállítható kettős koncentrációban.

Az EC húsleveset módosították novobiocinnal

Mérjünk be 36,7 g dehidratált közeget és oldjunk fel 1 liter vízben. A készítmény többi része megegyezik a fent leírtakkal.

használat

A teljes és széklet koliformák elemzése

Az EC-húsleves ideális a coliformák NMP-módszerrel történő vizsgálatának megerősítő szakaszához, mind vízmintákban, mind a gyógyszeripari termékekben és az élelmiszerekben..

A feltételezett fázisban kapott lazán zavaros és gáztermelő táptalajokat 2% -os fényes zöld epe-ben és az EC-táptalajban kell újból elhelyezni.

A teljes coliformák esetében az EC-táptalajokat aerobiosisban inkubáljuk 24-48 órán át 37 ° C-on, és székletcoliformák esetén aerobiosisban inkubáljuk 24-48 órán át 44 ° C-on..

Mindkét esetben a következőképpen értelmezzük: a zavaros csöveket gáztermeléssel pozitívnak tekintjük. Ha 24 órán belül nincs gáztermelés, az inkubációt 48 órán át folytatjuk.

Az EC pozitív húslevesek áthaladnak a teljes megerősítő fázisra, amely a szelektív tápközegben, például a Mac Conkey agarban, az EMB agarban vagy az Endo agarban való újbóli elszállítás..

Ha az alkalmazott húsleves EC-ben van módosítva novobiocinnal, akkor a pozitív csöveket ajánlott a Mac Conkey agarra sorbitollal újraindítani.

Minőségellenőrzés

A minőségellenőrzést minden egyes előkészített táptalajon kell elvégezni. Először meg kell vizsgálni a közeg sterilitását. Ebben az értelemben egy vagy két táptalajt inkubálunk aerobiosisban inokulálva 24 órán át 37 ° C-on. A várható eredmény egy átlátszó húsleves, zavarosság vagy színváltozás nélkül.

Másodszor értékelni kell az ismert törzsek növekedését, amelyre a következő baktériumok alkalmazhatók: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Minden esetben kielégítő mikrobiológiai fejlődés várható, és egy zavaros táptalajt figyeltünk meg a gáztermeléssel E. coli és Salmonella gáz nélkül.

Egyéb kontrollokba tartozó törzsek: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Ezeket a törzseket teljesen gátolni kell.

ajánlások

-A Durham csövek elhelyezése elengedhetetlen a koliformák vizsgálatához.

-A sterilizálás előtt terjessze a táptalajt a kémcsövekbe, soha ne tegye.

-Ne használja, ha a tápközegnek több mint 3 hónapja van.

-Ne használja, ha a közeg szokásos jellemzői megváltoznak.

referenciák

1. Laboratóriumok Britania. EC Közepes. 2015-ben elérhető: britanialab.com
2. E. coli enterohemorrhagiás. Élelmiszerbiztonsági és közegészségügyi központ. 2010. Elérhető: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. Közepes EC. Elérhető: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Az EC-t novobiocinnal módosítottuk. Elérhető: foodsafety.neogen.com
5. Mure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, Castillo M. Escherichia coli a sóka-toxin termelője frissen őrölt marhahústól a Concepciónban, Tucumán tartományban. Rev Microgol által Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Elérhető: www.scielo.org.