Karbamidleves alapozás, előkészítés és felhasználás

az karbamidleves egy folyékony tápközeg, amelyet bizonyos mikroorganizmusokban az ureáz enzim jelenlétének bizonyítására használunk. Az ureaz egy olyan mikrobiális enzim, amelyet konstitutívan állítanak elő, azaz szintetizálják függetlenül attól, hogy jelen van-e a szubsztrát, amelyen hat, vagy sem..

Az ureaz funkciója a szerves vegyületek bomlásához kapcsolódik. Nem minden mikroorganizmus képes szintetizálni ezt az enzimet, ezért meghatározása a laboratóriumban lehetővé teszi bizonyos bakteriális törzsek azonosítását, sőt ugyanazon nemzetség fajok közötti megkülönböztetést..

A karbamid-vizsgálatnak két típusa van: Stuart és Christensen. Ezek összetétele és érzékenysége különböznek. Az első olyan, hogy a Proteus nemzetség fajai által termelt ureazt nagy mennyiségben mutatják.

A második érzékenyebb, és képes kimutatni kis mennyiségű ureazt, amelyet más baktériumok nemzetségei, például Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter és Mycobacterium generálnak..

A Stuart karbamid-tápközeg karbamidot, nátrium-kloridot, dikálium-foszfátot, monokálium-foszfátot, élesztőkivonatot, fenolvörös és desztillált vizet tartalmaz..

Míg Christensen-húsleves vagy agar-karbamid peptonokból, nátrium-kloridból, monokálium-foszfátból, glükózból, karbamidból, fenolvörösből, desztillált vízből és agar-agarból áll. Az utóbbi csak akkor, ha a szilárd médium.

index

• 1 Alapítvány
  • 1.1. Stuart karbamidleves
  • 1.2 Christensen húsleves vagy agar-karbamid
  • 1.3 Mindkét média értelmezése (Stuart és Christensen)
• 2 Előkészítés
  • 2.1. Stuart karbamidleves
  • 2.2 Christensen húsleves vagy agar-karbamid
• 3 Használat
• 4 A karbamid-teszt eladása
• 5 Minőségellenőrzés
• 6 Referenciák

alapítvány

Az ureazt enzim hidrolizálja a karbamidot széndioxid, víz és két ammónia molekula képződéséhez. Ezek a vegyületek reagálnak az ammónium-karbonátnak nevezett végtermék előállítására.

Stuart karbamidleves

A Stuart-karbamid-táptalaj pufferelt, pH-ja 6,8. Ezért a mikroorganizmusnak képesnek kell lennie nagy mennyiségű ammónium képződésére, hogy vörös legyen fenolokká. A pH-értéknek 8 fölé kell emelkednie.

Ezért a Stuart-karbamid-táptalaj szelektív a Proteus fajokra, és 24–48 órás inkubáció után pozitív eredményt ad, és nem hatékony olyan baktériumok esetében, amelyek kis mennyiségű ureazt termelnek vagy lassan hidrolizálják a karbamidot.

Ez azért van, mert a Proteus fajok képesek a karbamidot nitrogénforrásként használni. Ezzel szemben más ureazt termelő baktériumoknak további forrásra van szükségük.

Pérez et al. (2002) megállapította, hogy a Stuart urea-táptalaj ugyanolyan hatékony volt, mint a Christensen karbamid agarja, a Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon és Saccharomyces nemzetség élesztő törzseinek meghatározására..

A vizsgálat szerzői azt állítják, hogy mindkét közeggel (Stuart és Christensen) 24% és 48 órás inkubálással 100% -os egybeesést értek el; azzal a feltétellel, hogy pozitívan vették el azokat a törzseket, amelyeknek sikerült erős rózsaszínű-fukszia színűvé tenni a médiát.

Ez a tisztázás szükséges, mivel Lodder (1970) megerősítette, hogy majdnem minden élesztő képes a kristályos urea agar ferde vonalát halvány rózsaszínre helyezni. Ennek oka, hogy a karbamidot minimális mennyiségben hidrolizálják, és aminok képződhetnek a felületen lévő aminosavak oxidatív dekarboxilezésével. Ezt nem lehet pozitívnak tekinteni.

Broth vagy urea-agar Christensen-től

A Christensen karbamidleves vagy az agar kevésbé pufferolt, így képes kis mennyiségű ammónium kimutatására. Ezenkívül ez a közeg peptonokkal és glükózzal van dúsítva. Ezek a vegyületek más ureazt termelő mikroorganizmusokat okoznak, amelyek nem nőnek a Stuart húslevesben.

Hasonlóképpen, a Christensen karbamid-vizsgálata gyorsabb eredményeket kínál, különösen a Proteus esetében, mivel a lehető legkisebb 30 perc alatt és maximálisan maximum 6 óra alatt maximálisan pozitív eredményt adhat..

A többi ureazt termelő mikroorganizmus 6 óra múlva, majd 24, 48, 72 órás vagy annál hosszabb idő után enyhén megfordítja a közeg színét, és még néhány törzs 5 vagy 6 nap után is gyenge reakciókat adhat..

Mindkét média értelmezése (Stuart és Christensen)

A közeg eredetileg sárga-narancssárga színű, és pozitív reakciója a közeg színét rózsaszín-fuksziavá alakítja. A szín intenzitása közvetlenül arányos a termelt ammónium mennyiségével.

A negatív reakció az eredeti színt hagyja el az élesztők kivételével, amelyek halvány rózsaszínűek lehetnek Christensen karbamid agarral..

előkészítés

Stuart karbamidleves

Mérjük meg a szükséges grammokat a kereskedelmi ház jelzése szerint. Oldjuk fel előnyösen steril desztillált vízben. Ne használjon hőt feloldódni, mert a karbamid érzékeny a hőre.

A membránszűrési módszert sterilizálják. Ehhez 0,45 μm átmérőjű pórusú Millipore szűrőt használnak. Ne használjon autoklávot. Miután az oldatot szűrjük, steril csövekben elosztjuk. Megbízható eredmények elérése érdekében a csövönként legfeljebb 1,5 ml-t kell 3 ml-re áthelyezni..

Használat előtt hűtőszekrényben tárolandó.

Ha a szűrési módszer nem áll rendelkezésre, a közeg azonnal felhasználható a megbízható eredmények elérése érdekében.

Egy másik módja a karbamid Stuart húsleves előkészítésének:

Néhány kereskedelmi ház eladja a karbamid-vizsgálat felét a karbamid kivételével.

A kereskedelmi ház által feltüntetett összeget mérik. Ezt desztillált vízben oldjuk, és az autoklávban 121 ° C-on 15 percig sterilizáljuk. Hagyjuk kicsit pihenni, és ha a közeg meleg, adjunk hozzá 100 ml 20% -os karbamid-oldatot, és szűréssel sterilizáljuk..

Steril csövekben oszlik el, amint azt korábban leírtuk.

Broth vagy urea-agar Christensen-től

-A karbamid oldat elkészítése

Mérjünk be 29 g dehidratált karbamidot és oldjunk fel 100 ml desztillált vízben. A sterilizáláshoz használja a szűrési módszert. Ne autoklávozzon.

-Karbamid bázis agar

24 g dehidratált bázis agart 950 ml desztillált vízben oldunk. Sterilizáljuk az autoklávban 121 ° C-on 15 percig. Hagyja állni, amíg el nem éri az 50 ° C-os hőmérsékletet, és az aszeptikusan hozzáadja az előzőleg elkészített karbamidot.

Öntsünk 4-5 ml-t steril csövekbe, és döntsük, amíg megszilárdulnak. Hosszú fuvola csúcsra van szükség.

Ez a közeg folyékony formában is előállítható.

alkalmazások

A karbamid-vizsgálat rendkívül hatékony a Proteus nemzetségnek az Enterobacteriaceae család más nemzetségéből való megkülönböztetésére, tekintettel a Proteus gyors reakciójára..

Ha Christensen összetételét használjuk, akkor a teszt segít különbséget tenni az azonos nemzetségbe tartozó fajok között. Például, S. haemolyticus és S. warneri stovább Staphylococcus koaguláz negatív és betahemolitikus, de különböznek egymástól S. haemolyticus negatív karbamid és S. warneri pozitív karbamid.

Másrészről, McNulty sikeresen 2% Christensen urea-tápközeget használt fel, hogy tanulmányozza a jelenlétét Helicobacter pylori a gyomor nyálkahártyájából vett biopsziák mintáiban (antral régió).

A jelenléte H. pylori azt pozitív karbamid-teszt bizonyítja. Az eredmények megfigyelésének időtartama közvetlenül arányos a jelen lévő mikroorganizmusok mennyiségével.

Mint látható, ez egy egyszerű módszer a diagnosztizálására Helicobacter pylori gyomor biopsziában.

Végül ez a teszt alkalmas a Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus és Mycobacteria nemzetségek fajainak megkülönböztetésére is..

A karbamid-teszt vetés

A két módszer erős mikrobiális inokulumot igényel az eredmények optimalizálása érdekében. A bakteriális telepeket előnyösen kivétel nélkül a vér-agarból és a Sabouraud agar élesztőből veszik. Az inokulumot a folyékony közegben emulgeáljuk.

A Stuart urea-táptalajon, amelyet 37 ° C-on inkubáltunk 24-48 órán keresztül, tudva, hogy csak a Proteus nemzetség törzseit keresi, ha a törzs baktérium. Az élesztőhöz 37 ° C-on vagy szobahőmérsékleten inkubálható 24-48 órás inkubálás.

A Christensen karbamidleves esetében 37 ° C-on inkubáljuk 24 órán át. Ha a vizsgálat negatív, akkor 6 napig inkubálható. Ha a vizsgálat 6 óráig pozitív, azt jelzi, hogy ez a Proteus nemzetség törzse.

A Christensen karbamid agar esetében az agar ferde feszítése erőteljesen beoltott, szúrás nélkül. A levest ugyanúgy inkubáljuk és értelmezzük.

Minőségellenőrzés

A táptalaj tesztelésére a kontroll törzseket használhatjuk, például Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 és Salmonella typhimurium.  Az első kettőnek pozitív eredményeket és az utolsó két negatív eredményt kell adnia.

referenciák

1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. et al. Stuart urea-táptalaj használata az ureazteszthez, mint az élesztők diagnózisának vizsgálata. Soc. Ven. Microbiol. 2002; 22 (2): 136-140. Elérhető: Scielo.org.
2. Mac Faddin J. (2003). Biokémiai vizsgálatok klinikai jelentőségű baktériumok azonosítására. 3. szerk. Szerkesztői Panamericana. Buenos Aires Argentína.
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.
5. Laboratóriumok Britania. Christensen Medio (Urea agar bázis) 2015. Rendelkezésre áll: britanialab.com