Tetrathionát húsleves alapozás, elkészítés és felhasználás

az tetratingate húsleves vagy TT húsleves egy szelektív folyékony táptalaj a Salmonella törzsek dúsítására és visszanyerésére. Müeller készítette, később Kauffmann módosította, ezért vannak olyanok, akik Müeller-Kauffmann húslevesnek nevezik.

Az eredeti közeg proteóz peptonokat, kalcium-karbonátot és nátrium-tioszulfátot tartalmazott. Kauffmann hozzáadott epe-sókat, és újabb modalitást teremtett fényes zöld színnel. Ezek az anyagok gátolják a koliformák növekedését, így a szabad tápközeg a patogén baktériumok kialakulásához vezet, ebben az esetben a Salmonella..

A módosítás nagyon sikeres volt, mert jelentősen növelte a közeg érzékenységét. Ezért jelenleg hasznos a Salmonellák bármilyen típusú mintában történő keresésében, de különösen szilárd vagy folyékony székletben és ételben..

A készítmény két fázisból áll; a kereskedelmi tápközeg a tetrationát-táptalaj előkészítésének alapja, majd a képződő tetrationát előállításához jódozott jódoldatot adagolunk a közeg befejezéséhez..

Az amerikai közegészségügyi szövetség (APHA) ajánlja a tetrionáttartalmú étrend zöldséggel kiegészített, a Salmonella-t kereső minták gazdagítására, mivel szelektívebb, mint a tetrathionát-húsleves és a szelénleves.

Általában a tetrathionát húsleves ideális, ha a Salmonella nemzetségbe tartozó baktériumokat kis mennyiségben gyanítják vagy gátolják a gátló anyagokkal való érintkezés vagy az ipari folyamatok, amelyek minimalizálják az életképességüket.

index

• 1 Alapítvány
• 2 Előkészítés
  • 2.1 - Tetrationát
  • 2.2 -Tranthet tetrationát húsleves, élénkzöld
• 3 Használja
• 4 Minőségellenőrzés
• 5 Ajánlások
• 6 Referenciák

alapítvány

A jelen peptonok megfelelnek a kazein hasnyálmirigy emésztésének és az állati szövet peptikus emésztésének. Ezek a baktériumok növekedéséhez általában a szén, a nitrogén és a tápanyagok forrását jelentik.

A nátrium-tioszulfát a jódozott oldattal reagáltatva tetrationátot képez. Ez gátolja a coliformák növekedését, és támogatja a tetrathionát-reduktáz enzimet tartalmazó baktériumok kialakulását, köztük a Salmonella nemzetség, de a Proteus is..

Az epesók sók szintén a legtöbb Gram-pozitív baktérium és néhány Gram-negatív baktérium (coliform) gátló anyagaként hatnak..

A kalcium-karbonát elnyeli a tetrathionát bomlása során keletkező mérgező anyagokat, amelyek kénsavat képeznek. Ebben az értelemben a kalcium-karbonát semlegesíti a stabil tápközeg pH-értékét.

Élénkzöld modalitás esetén ez az anyag növeli a tetrathionát tápközeg szelektív teljesítményét a Salmonella nemhez tartozó más mikroorganizmusok gátlásával..

előkészítés

-Tetratingate húsleves

Jód-jódoldat

sajnálom:

• 6 g jód.
• 5 g kálium-jodidot.

A kálium-jodidot körülbelül 5 ml steril desztillált vízben oldjuk, majd a jódot csekély mértékben adjuk hozzá, miközben a keveréket melegítjük. Teljes feloldódása után steril desztillált vízzel töltöttük, amíg el nem éri a 20 ml végső térfogatot.

Félbázis a tetrathionát leveshez

Mérjünk 46 g dehidratált közeget, és 1 liter steril desztillált vízben szuszpendáljuk. Keverjük össze és melegítsük fel, amíg teljesen fel nem oldódik, csak néhány percig forralhat. Ne sterilizáljon autoklávban. A táptalaj bázisát hagyjuk lehűlni körülbelül 45 ° C-ra, és ekkor hozzáadunk 20 ml jódozott oldatot..

Az oldat hozzáadása után az ioduradát azonnal fel kell használni. Ha nem akarja használni a teljes keveréket, tegye a következőket:

A bázisközeg 10 ml-ét csövekbe osztjuk, és csak 0,2 ml jódozott oldatot adunk a mintákkal beoltandó oldathoz..

Azok, akiket nem fognak használni, még hűtőszekrényben is tárolhatók, azonban mivel a közeget nem sterilizálják, az ideális a szükséges mennyiség előkészítése..

A tápközeg színe a jódozott jódoldat hozzáadása előtt tejfehér, fehér csapadék és a hozzáadás után barna, sűrű csapadékkal. A megfigyelt csapadék normális, és megfelel a nem oldódó kalcium-karbonátnak. A közeg végső pH-ja 8,4 ± 0,2.

-Tetrathionát húsleves variáns, világos zöld

A tetrathionát-táptalajt fényes zöldséggel előállítjuk, a fentiekben leírt összes lépést elvégezzük, de a keverékhez hozzáadunk 10 ml 0,1% -os mennyiségben előállított világos zöld oldatot..

Világos zöld

Ez a megoldás az alábbiak szerint készül:

Mérjünk be 0,1 g fényes zöldt és szuszpendáljuk 100 ml desztillált vízben. Forrásig melegítsük a teljes oldódás elérése érdekében. Mentés borostyán üvegben.

használat

Székletminták (székletkultúra) esetén a protokoll a következő:

1 g szilárd székletet vagy 1 ml folyékony székletet oltunk be egy csőben 10 ml felhasználásra kész tetrathionát tápközeggel. Erősen rázzuk, és aerobiosisban inkubáljuk 43 ° C-on 6-24 órán keresztül.

Ezt követően 10 és 20 μl közötti mennyiségű alikvotot veszünk fel, és szubkultáljuk a Salmonella-ra szelektív táptalajban, például SS agar, XLD agar, fényes zöld agar, Hektoen enterális agar..

Ezzel párhuzamosan a Salmonella szelektív tápközegét be kell oltani a közvetlen mintával (széklet), dúsítás nélkül. A rektális tamponok mintáira töltse le a csőbe gyűjtött anyagot, és folytassa a fent leírt módon.

Élelmiszerminták esetén 10 g szilárd táplálékot vagy 10 ml folyékony élelmiszert mérjünk be, és 100 ml-es felhasználásra kész tetrathionát-táptalajt oltunk be. A fent leírt módon járjunk el, de 37 ° C-on inkubáljuk.

Mint látható, a minta és a húslevél közötti kapcsolat mindig 1:10 lesz.

Minőségellenőrzés

A tenyésztőközeg teszteléséhez ismert kontroll törzseket alkalmazhatunk. A leggyakrabban használt ATCC minősített törzsek.

Az alkalmazandó törzsek Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 és Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Salmonella törzsek esetében kiváló fejlődés várható Escherichia coli gyengén vagy rendszeresen fejlődhet, és a Gram-pozitív törzsek (Enterococcus és Staphylococcus) részben vagy teljesen gátolhatók.

ajánlások

-Mivel ez a tápközeg nem gátolja a Proteus növekedését, néhány laboratórium 40 mg / l novobiocint használ a mikrobiális törzs kialakulásának megelőzésére. Az antibiotikumot az jódozott jódoldat előtt kell hozzáadni.

-A jódozott jódoldatot tartalmazó közeg elkészítése után az inokuláció után nem lehet több, mint 2 óra.

-A tápközeg csövekben való elosztásának pillanatában a keveréket folyamatosan kell homogenizálni, hogy a képződött csapadékot újra szuszpendáljuk.

-A kevésbé szennyezett mintákban a tetrationát-táptalajt 35-37 ° C-on inkubáljuk, és erősen szennyezett mintákban 43 ° C-on történő inkubációt ajánljuk..

referenciák

1. Conda Pronadisa laboratórium. 2010. A tetrathionát táptalaj alapja Müeller-Kauffmann szerint. Elérhető:
2. BD laboratóriumok 2003. Tetrathionátos táptalajalap. Elérhető:
3. Laboratóriumok Britania. 2015. Tetionát húsleves. Elérhető:
4. Média BBL. 2005. Csőkészítmények Salmonella fajok termesztésére.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. A nátrium-szelenit és a nátrium-tetrationát táptalajainak összehasonlítása, mindkettő 37 ° C-on és 42 ° C-on inkubálva elszigeteltsége Salmonella spp hordozó széklet. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220