MIO közegalapítás, előkészítés és felhasználás

az fél MIO egy biokémiai vizsgálat, amelyet az Enterobacteriaceae családba tartozó baktériumfajok azonosítására használnak. Elég tápláló és glükózból, élesztőkivonatból, peptonból, tripteinből, L-ornitin-hidrokloridból, bromokrezol lila és agarból áll..

A rövidítése (MIO) jelentése az ebben a közegben megfigyelhető valamennyi paramétert jelenti; motilitás, indol és ornitin. A motilitás a mikroorganizmus azon képessége, hogy a flagella jelenlétével mozogjon. Annak érdekében, hogy ezt a tulajdonságot megfigyelhessük, a közeg konzisztenciájának félig szilárdnak kell lennie, így a készítmény kevesebb agart tartalmaz..

Az indol termelés bizonyítja a triptofanáz enzim jelenlétét, amely a triptofán aminosavára hat, szükségessé téve egy kioldó reagens használatát, hogy az indol termelés látható legyen.

Végül az ornitin meghatározza, hogy a baktérium képes-e dekarboxilezni az aminosavat, azaz ha az orinitin-dekarboxiláz enzim rendelkezik..

index

• 1 Alapítvány
  • 1.1. Pepton, élesztőkivonat és triptein
  • 1.2 Motilitás
  • 1.3 Glükóz
  • 1.4 L-ornitin
  • 1.5 pH-indikátor
• 2 Vetés és fejlesztés
• 3 Előkészítés
  • 3.1 MIO közepes
  • 3.2 Kovacs reagens (Indol tesztfejlesztő)
• 4 Használja
• 5 Minőségellenőrzés
• 6 Referenciák

alapítvány

Pepton, élesztőkivonat és triptein

Ezek az elemek hozzájárulnak ennek a táptalajnak a tápláló erejéhez. A tápanyagok és esszenciális aminosavak forrásaként szolgálnak a bakteriális fejlődéshez.

Ezen túlmenően, a triptein a triptofán forrása, hogy bizonyítsa a triptofanáz enzim jelenlétét, amely reduktív deaminációval felszabadítja a triptofánt, felszabadító indol, piruvinsav, ammónia és energia..

Az indol színtelen, ezért jelenlétét öt csepp Ehrlich vagy Kovacs reagens hozzáadásával mutatjuk be, mindkettőt p-dimetilaminobenzaldehiddel..

Ennek a vegyületnek az aldehidcsoportja reagál az indollal, és gyűrű alakú fukszia-vörös terméket állít elő az agar felületén.

Bármilyen színjelzést pozitív bizonyítéknak kell tekinteni. A tesztet azonnal el kell olvasni, mert egy idő után a szín romlik.

Másrészről ezt a vizsgálatot az ornitin mozgékonyságának és dekarboxilezésének eredményeinek rögzítése után kell feltárni..

értelmezés

Pozitív teszt: fukszia piros gyűrű képződése, amikor Kovacs reagenst csepegtet.

Negatív teszt: nincs gyűrűképződés.

mozgékonyság

A baktériumok mozgásának képességét bizonyítja, ha zavaros közeg figyelhető meg, vagy ha van egy vastag növekedési vonal, amely a kezdeti beoltás körül terjed..

A negatív mozgékonysági tesztet egy vékony növekedési vonal megfigyelése bizonyítja, és mindenütt növekedés nélkül lesz.

Fontos, hogy a motilitást az indol felfedése előtt olvassuk le, mivel a reagens hozzáadása felhordja a teljes közeget.

Mozgó, de lassan növekvő baktériumokban nehéz ezt a táptalajt bizonyítani. Ebben az esetben ajánlott más teszteket vagy módszereket használni, mint például a motilitási közeg vagy a csepegtető módszer.

szőlőcukor

A glükóz az a fermentálható szénhidrát, amely az energia biztosítása mellett a közeget megsavanyítja, ami az ornitin aminosav dekarboxilezésének szükséges feltétele..

A glükóz fermentációját mindig az alapelv alapján kell megállapítani, hogy az Enterobacteriaceae családba tartozó összes baktérium glükóz.

L-ornitin

Ha a baktérium az ornitin-dekarboxiláz enzimet termeli, akkor hatással lehet, ha a tápközeget a glükóz fermentálásával savanyították..

Az ornitin-dekarboxiláz enzim az aminosav karboxilcsoportjára hat, ami egy ún..

Ezt a tesztet 24 órás inkubálás után kell elolvasni, mert ha megpróbál olvasni, mielőtt tévesen értelmezné a tesztet hamis negatív.

Emlékeztetni kell arra, hogy az első reakció a glükóz fermentálása, így a tápközeg kezdeti fázisban (első 10-12 óra) sárgává válik. Ha az ornitin dekarboxilezése ezt követően következik be, a közeg lila színűvé válik.

Fontos az ornitin-dekarboxilezési teszt értelmezése az indol feltárása előtt, mivel a Kovacs reagens hozzáadása módosítja a közeg színét..

értelmezés

Negatív teszt: közepes sárga vagy sárga háttérrel.

Pozitív teszt: teljesen lila.

PH jelző

Ebben az esetben a bromokrezol lila-t használják; az a személy, aki a közepén a pH-változás feltárásáért felelős. Amikor savanyított, a jelző sárgare vált, és ha lúgosodik, lila színűvé válik.

A vetőmag és a fejlesztési technika

A MIO táptalaj ültetéséhez egyenes hurkot vagy tűt használunk, és ezzel együtt a vizsgált kolónia egy részét összegyűjtjük..

A mélynyomás a MIO közegben egyenes vonalban történik. Nem célszerű kettős szúrást végrehajtani, mivel hamis motilitási képet adhat, ha a lyukasztásokat nem ugyanabban a helyen végezzük el.

Inkubáljuk 24-48 órán át 37 ° C-on aerobiosisban. Figyeljük meg az eredményeket ebben a sorrendben: mozgékonyság, ornitin dekarboxilezése és végül az indol felfedése.

Javasoljuk, hogy aszeptikusan vegyünk 2 ml táptalajt, helyezzük át egy steril csőbe, és végezzük el az indol tesztet, hogy ha negatív, az eredeti cső többi része 24 órán át inkubálható, hogy ismét feltárja az indolt..

Az indol kialakulását a következő módon hajtjuk végre: 3-5 csepp Kovacs reagenst adunk az MIO tápközeghez, és erőteljesen keverjük. Megfigyelhető, ha egy fukszia piros gyűrű jelenik meg, vagy sem.

előkészítés

Fél MIO

Mérjünk be 31 g MIO táptalajt és oldjunk fel egy liter desztillált vízben.

Melegítsük addig, amíg az elegyet egy percig forraljuk, és gyakran keverjük, amíg az agar teljesen fel nem oldódik. A táptalajt 4 ml-t elosztjuk 13/100 kémcsőben pamut fedéllel.

Sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 15 percig. Távolítsa el az autoklávból, és hagyja, hogy egy állványban egyenesen álljon, oly módon, hogy félig szilárd blokk képződjön.

Hűtőszekrényben 2-8 ° C-on tárolandó. A baktériumtörzs beültetése előtt hagyjuk enyhíteni.

A dehidratált közeg színe bézs és a közepes enyhén lila opálos anyag.

Az elkészített közeg végső pH-ja 6,5 ​​± 0,2

A közeg savas pH-val sárgare változik, lúgos, lúgos pH-n.

Kovacs reagens (Indole tesztfejlesztő)

Ez a reagens a következőképpen állítható elő:

150 ml amil-, izoamil- vagy butil-alkoholt (a három közül bármelyik) mérünk. Ebben 10 g p-dimetil-amino-benzaldehidet oldunk. Ezután lassan hozzáadunk 50 ml tömény sósavat.

Az elkészített reagens színtelen vagy világos sárga. Ezt borostyán üvegben kell tárolni, és hűtőszekrényben kell tartani. A sötétbarna szín romlik.

A Kovacs reagens is helyettesíthető az Ehrlich reagenssel. Az utóbbi, érzékenyebb, előnyösebb, ha minimális mennyiségben termelődő baktériumokban az indolt mutatják, mint néhány Gram-negatív, nem fermentáló bacillában és bizonyos anaerobokban.

használat

Ez a közeg olyan teszt, amely kiegészíti az Enterobacteriaceae családba tartozó baktériumok azonosítására szolgáló biokémiai teszteket..

Az ornitin de-karboxilezési adatai megkülönböztetik egymást Shigella sonnei, ami pozitív, a Shigella boydii, Shigella flexneri és S. dysenterieae, amelyek negatívokat adnak.

A Klebsiella nemzetséget is megkülönbözteti, amely az Enterobacter nemzetséget adja, ahol a legtöbb faj pozitív..

Minőségellenőrzés

Minden alkalommal, amikor egy MIO táptalajt készítünk, szabályozó tesztet végezhetünk. Ehhez ismert vagy tanúsított törzseket használunk a közeg viselkedésének megfigyelésére.

A felhasználható törzsek Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes és Proteus mirabilis.

A várt eredmények E. coli és M. morganii. Dan M: +, I: + és O: +.

Klebsiella pneumoniae mindent negatív (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis és Enterobacter aerogenes dan M: + I: - és O: +.

referenciák

1. Mac Faddin J. (2003). Biokémiai vizsgálatok klinikai jelentőségű baktériumok azonosítására. 3. szerk. Szerkesztői Panamericana. Buenos Aires Argentína.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.
4. Laboratóriumok Britania. MIO Medio 2015. Elérhető: britanialab.com
5. BD laboratóriumok BBL Motility Indole Ornitin (MIO) közeg. 2007. A következő címen érhető el: bd.com
6. Valtek Laboratories Médium M.I.O. Motilitás, Indole, Ornitin. 2010. Elérhető: andinamedica.com