Voges-Proskauer tesztalap, előkészítés és felhasználás

az Voges-Proskauer teszt egy biokémiai vizsgálat, amelyet az Enterobacteriaceae családba tartozó baktériumok azonosítására használnak. Különösen hasznos a különbségtétel a Escherichia coli az Klebsiella és Enterobacter, többek között.

A vizsgálatot olyan folyékony tápközegben hajtjuk végre, amelyet metil-vörös-Voges Proskauer néven ismertünk, amely jobban ismert az RM / VP rövidítéssel. Ez a tápközeg pufferolt polipononból, glükózból, dikálium-foszfátból és desztillált vízből áll.

A jelenlegi RM / VP közeg a Clark és Lubs közeg módosítása, amely eredetileg alacsonyabb koncentrációjú peptonokat és glükózt tartalmazott. Ezért kevésbé hidrogénion keletkezett, ami a pozitív Voges-Proskauer reakcióhoz szükséges.

A vizsgálat azon a képességen alapul, hogy a mikroorganizmus a glükózt butilénglikol útján használja, és egy semleges végterméket képez acetoinnak, oxigén és lúgos pH jelenlétében..

Az RM / VP közegben a Voges-Proskauer teszt feltárása mellett a metilvörös teszt is kimutatható..

index

• 1 Alapítvány
  • 1.1 A Voges-Proskauer teszt alapja
  • 1.2 A teszt és az értelmezés fejlesztésének alapja
• 2 Előkészítés
  • 2.1 Közepes RM / VP
  • 2.2 Voges A Reagent
  • 2.3 Voges B reagens
• 3 A Voges-Proskauer tesztje
  • 3.1 A vizsgálat kidolgozása
• 4 Használja
• 5 Minőségellenőrzés
• 6 Referenciák

alapítvány

A Voges-Proskauer teszt alapja

A tápközegben jelenlévő pluripeptonák biztosítják a bakteriális növekedéshez nélkülözhetetlen táplálkozási követelményeket. A glükóz a fő összetevő. Sok baktérium képes a glükóz metabolizálására és piruvinsav képződésére.

A piruvinsav a glükóz metabolizmusának középpontja, és onnan minden mikroorganizmus különböző útvonalakat vehet igénybe. Egyesek vegyes savakat, például tejsavat, ecetsavat, hangyasavat és borostyánkősavat képeznek, és mások semleges termékeket, például 2,3-butándiolt képeznek..

A Voges-Proskauer-teszt azt mutatja, hogy a mikroorganizmus képes acetil-metil-karbinolt (acetoint) képezni, amely 2,3-butándiol közbenső terméke aerob körülmények között.

Acetoint redukálunk és 2,3-butándiolt képezünk, de ez a reakció reverzibilis, így ha 2,3-butándiol oxidálódik, acetoint képez. Ezért az oxigén elengedhetetlen.

A dikálium-foszfát a puffer, amely a keveréket 6,9 ± 0,2 pH-n nedvesíti..

A teszt és az értelmezés fejlesztésének alapja

A reakció bemutatásához két reagenst (Barrit reagens) kell kifejleszteni, amelyek Voges A és Voges B néven ismertek..

A Voges A egy a-naftol 5% -os oldata, és a Voges B egy 40% -os kálium-hidroxid készítmény. Ha a kálium-hidroxid nem áll rendelkezésre, akkor 40% -os nátrium-hidroxiddal helyettesíthető.

A Α-naftol olyan katalizátor, amely növeli a reakció színének intenzitását, ami érzékenyebbé teszi a tesztet. Az a-naftolt mindig először hozzá kell adni, a csövet úgy kell keverni, hogy a közeg érintkezzen az oxigénnel. Ily módon a jelenlévő acetoin diacetil-oxidokká oxidálódik, és a 2,3-butándiolt oxidálva acetoin képződik, és átadjuk a diacetilcsoportnak.

Így kötődik az a-naftol a diacetilhez, amely viszont az arginin aminosavban lévő guanidinmaghoz kapcsolódik, amely utóbbi a pluripeptonákból származik..

A kálium- vagy nátrium-hidroxid felelős a CO elnyeléséért₂ és reagál a peptonokkal. Ez a reakció rózsaszín-lazacszín kialakulását eredményezi, amely jól látható a cső nagyon jól rázása után.

Ahhoz, hogy a színezés azonnal bekövetkezzen, megfelelő mennyiségű diacetil-, pepton- és a-naftint kell összekeverni. Ha ez nem történik meg, hagyja a csövet 15 percig a tolmácsolás előtt.

Általában a vizsgálat 2-5 perc után pozitív, ha gyenge rózsaszín színt észlel. Ha 30 perc és 1 óra közötti pihenés marad, a szín intenzitása maximális lesz (mélyvörös).

Negatív teszt lesz látható, amikor a húsleves sárga. 1 óra elteltével, ha a vizsgálat negatív, a kálium-hidroxid α-naftol reakciója eredményeként rézszín képződik..

előkészítés

Közepes RM / VP

Mérjünk be 17 g dehidratált táptalajt és oldjunk fel egy liter desztillált vízben. Hagyjuk állni 5 percig. Forraljuk, amíg teljesen fel nem oldódik. 3–4 ml-t tálalunk csövekben és sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 15 percig.

A dehidratált tápközeg bézs, és az előkészített közeg világos borostyán.

A közeg végső pH-ja 6,9 ± 0,2.

Voges A Reagent

Mérjünk be 5 g α-naftolt és oldjunk fel 50 ml etil-alkoholban (abszolút). Ezt követően etil-alkoholt adunk hozzá 100 ml-re.

Voges B reagens

Mérjünk be 40 g kálium-hidroxidot és oldjuk 50 ml desztillált vízben egy főzőpohárban. Az üveget hideg vízfürdőbe kell helyezni a hőmérséklet szabályozására, mert a készítmény feloldása idején meredeken emelkedik.

Miután az oldat hideg volt, átvisszük egy gradiens ballonba, és desztillált vízzel 100 ml-re emeljük.

A Voges-Proskauer tesztje

A Voges-Proskauer teszt elvégzéséhez egy RM / VP-táptalajt beoltunk a vizsgált mikroorganizmussal, egy tiszta 24-18 órás tenyészetből..

Az inokulum nem lehet túl sűrű. A reakcióelegyet 35-37 ° C-on inkubáljuk 24-48 órán át, bár néha néhány napig inkubálásra van szükség. A Cowan és a Steel úgy véli, hogy az 5 nap a minimális inkubációs idő az Enterobacteriaceae család összes pozitív Voges-Proskauer (VP) fajának észleléséhez.

A vizsgálat kidolgozása

Vegyünk fel egy 1 ml-es alikvotot egy csőben és végezzük el a fejlődést az alábbiak szerint: tegyünk 12 csepp (0,6 ml) Voges A reagenst és 4 csepp (0,2 ml) Voges B. Mixet, hogy levegőztesse és álljon 5 - 10 perccel a teljesítés előtt. Ha azonban a vizsgálat még mindig negatív, hagyja állni és figyelje a csövet 30 perc - 1 óra múlva.

A rózsaszín-piros szín megjelenése azt jelzi, hogy a Voges-Proskauer reakció pozitív. Ha a közeg sárga marad, a reakció negatív.

A hamis negatívok elkerülése érdekében a fejlesztőknek a feltüntetett sorrendben és mennyiségben történő hozzáadása szükséges.

használat

A Voges-Proskauer-teszt alkalmas arra, hogy megkülönböztessük a E. coli a Klebsiella, Enterobacter, Serratia nemzetségek, amelyek VP pozitívak.

Minőségellenőrzés

A kontroll törzsek felhasználhatók az előkészített közeg minőségének tesztelésére. Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium és Enterobacter cloacae ATCC 13047.

A várt eredmények csak a Voges-Proskauer pozitív reakciói K. pneumoniae és E. cloacae. A többi negatív reakciót ad.

referenciák

1. Laboratóriumok Britania. MR-VP Közepes. 2015. Elérhető: www.britanialab.com
2. Microkit Laboratories M-Ident Voges Proskauer. 2014. Elérhető: http://www.medioscultivo.com
3. Mac Faddin J. (2003). Biokémiai vizsgálatok klinikai jelentőségű baktériumok azonosítására. 3. szerk. Szerkesztői Panamericana. Buenos Aires Argentína.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.
5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.