Agar csokoládé alapítvány, felhasználás és előkészítés



az csokoládé agar szilárd, dúsított, nem szelektív és nem differenciált táptalaj. Elsősorban a táplálkozási szempontból igényes mikroorganizmusok izolálására használják, bár bármilyen baktériumtípust képes termeszteni.

Éppen ezért hasznosíthatósága különösen a normálisan steril minták, például a CSF és az ízületi folyadék vetésében nő. Habár a polimikrobiális minták vetésére kiválasztott eszközök közé tartozik, de ezekben az esetekben antibiotikumokat kell hozzáadni, amelyek gátolják az egyidejű flórát.

Ez a közeg jellegzetes barna színű, nagyon hasonló a csokoládéhoz, így a neve. A készítmény nagyon hasonlít a vér agarra, csak ebben az esetben kell a vért melegíteni, hogy a vörösvérsejtek megszakadjanak.

A készítmény, mint a vér agar, nagyon finom, mivel könnyen szennyezhető. Emiatt sok laboratórium inkább a kereskedelmi minőséget biztosító kereskedelmi házak által előállított közeget szerzi be.

index

  • 1 Alapítvány
  • 2 Használat
    • 2.1 Columbia agarral készített csokoládé-agar
    • 2.2 GC-bázagarral készített csokoládé-agar (gonokokkokra)
    • 2.3. Müeller Hinton-agarral készített csokoládé-agar
    • 2.4 Thayer Martin agarral készített csokoládé-agar
  • 3 Előkészítés
    • 3.1 Számítások
    • 3.2 Mérjük meg és oldjuk fel
    • 3.3 Sterilizálás
    • 3.4 A vér összegyűjtése
    • 3.5 Másik módja a csokoládé-agar vérkészítés nélküli előállításának
  • 4 Minőségellenőrzés
  • 5 Referenciák

alapítvány

Ez a közeg tápanyagokban és fűtött vérben gazdag agarból áll. A vörösvérsejtek hemolízise biztosítja a X faktor (hemin) és a V faktor (NAD), amelyek néhány mikroorganizmus, például a nemzetség növekedéséhez szükségesek. Haemophilus. Ez is nagyon hasznos az elszigeteltség szempontjából Neisserias sp.

A vér agarhoz hasonlóan a különböző tápközegek is igény szerint bázis agarként használhatók. Az alkalmazott közegek közé tartoznak az agyi szív infúzió és a triptázis szója-agar, bár a leginkább ajánlott a Columbia agar, Müeller Hinton, GC agar és Thayer Martin agar..

A csokoládé-agar egyes változatai közé tartozik a kereskedelmi forgalomban kapható, dúsított kiegészítő, az Isovitalex vagy a Polivitex.

Ezek a kiegészítők B-vitamint tartalmaznak12, L-glutamin, adenin, guanin-hidroklorid, p-amino-benzoesav, nikotinamid-adenin-dinukleotid (NAD), tiamin-pirofoszfát, vas-nitrát, tiamin-hidroklorid, cisztein-hidroklorid, L-cisztin és glükóz.

Fontos megjegyezni, hogy a csokoládé-agar sokkal gazdagabb, mint a vér agar, de nem teszi lehetővé a hemolízis minták megfigyelését.

alkalmazások

Columbia agarral készített csokoládé-agar

Ez a tápközeg kazeint és szív hasnyálmirigy-emésztett, emésztett hús peptidet, nátrium-kloridot, agart, élesztőkivonatot és kukoricakeményítőt tartalmaz. Vitaminokban, ásványi anyagokban és esszenciális aminosavakban is gazdag.

Ez a fűtött véraljzat ideális a Neisseria nemzetség baktériumainak izolálásához. Másrészt, ha a táptalajhoz hozzáadunk egy Brucella-kiegészítést, akkor a fent említett mikroorganizmus izolálható. Az eredményeket a ló vérével javítjuk.

GC-bázis agarral készített csokoládé-agar (gonokokkokra)

Ez a tápközeg peptonokat, kukoricakeményítőt, egy- és kétbázisú puffereket, nátrium-kloridot és agart tartalmaz.

A legtöbb kereskedelmi forgalomban készített csokoládé-agar-prezentáció ebből a bázisból származik, és nem tartalmaz fűtött vért, hanem a hemin szintetikus keverékét és a növekedési faktorok, vitaminok, ásványi anyagok, aminosavak, V faktor és glükóz kémiai kiegészítését..

Müeller Hinton-agarral készített csokoládé-agar

Ezt az igényes mikroorganizmusok, mint pl Streptococcus pneumoniae 5% -os melegített ram-vér alkalmazásával.

Emellett a Neisserias és a Haemophilus elsődleges izolálására is szolgál, de abban az esetben, ha \ t Haemophilus előnyös a ló vér alkalmazása, mivel az X és V faktor gazdag forrása.

Másrészt, ha a vetendő minta nem steril területről származik, az antibiotikumok adagolása ajánlott a terület normális flórájának gátlására..

Példa a légúti mintákra, ahol gyanúja van a nemzetség baktériumainak jelenlétének Haemophilus A bacitracint a növekedés gátlására használják Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus és Saprophytic Neisseria.

A genitális chancre minták esetében, ahol gyanítható Haemophilus ducreyi, A következő módon készített csokoládé-agart sikeresen alkalmazták: Müeller-Hinton agar 5% -os chocolatized lóvérrel, 1% Isovitalex dúsítással és 3 μg / ml vankomicinnel.

Thayer Martin agarral készített csokoládé-agar

Ez a közeg különleges Neisseria gonorrhoeae. Tartalmazzon antibiotikumokat, hogy gátolja a kísérő növényt. Bárányvért használnak.

előkészítés

Figyelembe kell venni az alkalmazandó alap agar előállítására vonatkozó jelzéseket. A dehidratált közeg csomagolásának hátoldalán vannak. Általában azt írják le, hogy mennyit kell mérni egy liter táptalaj előállításához.

A laboratóriumban elkészítheti a pontos mennyiséget, több vagy kevesebb lehet, mint egy liter.

számítások

A három szabályt úgy határoztuk meg, hogy kiszámítsuk, hogy mennyit kell mérni a kívánt térfogat elkészítéséhez. például:

Ha 1 literre 40 grammot kell mérni, és a laboratórium 800 ml-t igényel, azt mondják:

1000 ml -40 gr

800 ml - X

A képlet a következő lesz:

X = 32 gr (800 ml-es súly).

Mérjük meg és oldjuk fel

A szükséges mennyiséget mérjük és vízzel egy fiolába helyezzük.

Melegítsük mérsékelt hőre, és óvatosan keverjük össze a forgó mozdulatokkal, amíg a dehidratált közeg teljesen fel nem oldódik..

sterilizálás

A fiolát az autoklávba juttatjuk, hogy a táptalajt 121 ° C-on sterilizáljuk 20 percig.

A vér összegyűjtése

Az autokláv elhagyása után hagyjuk nyugodni, amíg a közeg hőmérséklete körülbelül 56-70 ° C, hogy a vér elhelyezése és keverése addig tart, amíg a közeg barna lesz..

Ha kiegészítőket szeretne hozzáadni, akkor itt az ideje. Ezt követően keverjük össze és 20 ml-t adunk minden steril Petri-csészébe.

A teljes eljárást lamináris áramlású motorháztetőben vagy a Bunsen égő körül kell elvégezni.

Hagyja állni, amíg megszilárdul és hűtőszekrényben megfordul.

Egy másik módja a csokoládé-agar készítéséhez vér nélkül

A bázis táptalajt a fentiek szerint állítjuk elő, a kereskedelmi forgalomban kapható dehidratált hemoglobint feloldjuk és sterilizáljuk az autoklávban.

Mindkét oldatot hagyjuk 50 ° C-ra hűlni, csatlakozzanak hozzá és adjuk hozzá a kiegészítést. Keverjük össze aszeptikus körülmények között, majd steril petri-csészékben tálaljuk.

Minőségellenőrzés

Fontos, hogy a vér a jelzett hőmérsékletre kerüljön, mert ideális a vörösvérsejtek lizálásához, és ugyanakkor fenntartja a hőérzékeny V tényezőt..

Az agar felületén nem lehetnek buborékok. Minden 100 tányér-tételt egy vagy két tányért kell inkubálni a tűzhelyen 37 ° C-on 24 órán át, hogy ellenőrizze a sterilitást.

A legjobb eredmény érdekében a csokoládé agart röviddel az elkészítés után kell használni.

Ellenőrző baktériumtörzseket kell venni a laboratóriumban, hogy értékeljék a frissen elkészített táptalaj hatékonyságát a főbb, klinikai jelentőségű mikroorganizmusok növekedéséhez..

referenciák

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Gyakorlati klinikai mikrobiológia. Cadizi Egyetem, 2. kiadás. UCA Kiadványok Szolgáltatása.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Argentínában. Panamericana S.A szerkesztő.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. (5. kiadás). Argentína, szerkesztő Panamericana S.A..
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. A GC-Biocen Agar bázis tenyésztőközegének a mikrobiológiai laboratóriumban való alkalmazásának megvalósíthatósága. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. Elérhető: scielo.sld.
  5. Wikipédia közreműködők. Csokoládé-agar. Wikipédia, The Free Encyclopedia. 2018. december 17., 19:54 UTC. Elérhető: en.wikipedia.org.