Simmons citrát agar alapozás, előkészítés és felhasználás

az Simmons citrát agar Ez egy szilárd közeg, amelyet biokémiai tesztként használnak a mikroorganizmusok, különösen a Gram-negatív bacillák azonosítására. Az eredeti médiumot Koser 1923-ban hozta létre.

Koser citrát közege nátrium-foszfátot, ammónium-foszfátot, monokálium-foszfátot, magnézium-szulfátot és nátrium-citrátot tartalmazó húslevest tartalmaz..

Amint látható, a táptalaj egyetlen szénforrása a citrát, és a nitrogén ammónium-foszfát, a fehérjék és a szénhidrátok ezeknek az elemeknek a forrásaként nem szerepelnek, általában más közegben vannak jelen..

Ezért az e közegbe beoltott baktérium csak akkor képes reprodukálni, ha képes a citrát-szén felvételére. A vizsgálat pozitív volt, ha a közegben zavaros volt, azonban hátránya, hogy nem specifikus zavarosság léphet fel.

Ezt a problémát Simmons megoldotta agar és bromothymol kék hozzáadásával Koser eredeti képletéhez. Bár az elv ugyanaz, másképpen értelmezik.

index

• 1 Alapítvány
  • 1.1 Vetés üzemmód
  • 1.2 Értelmezés
• 2 Előkészítés
• 3 Használja
• 4 Végső megfontolások
  • 4.1 Inokulum
  • 4.2
  • 4.3 Színintenzitás
• 5 Referenciák

alapítvány

Egyes baktériumok képesek túlélni a fermentáció vagy a tejsav termelése hiányában, és más szubsztrátok használatával energiát kell szerezniük. Ebben a vizsgálatban az egyetlen kínált szénforrás a citrát.

Azok a baktériumok, amelyek ezekben a körülmények között képesek túlélni, a hagyományos módon történő alternatíván keresztül gyorsan a citrátot metabolizálják a trikarbonsav ciklus vagy a citrát fermentációs ciklus alkalmazásával..

A citrát baktériumok által okozott katabolizmusa egy koenzim A. beavatkozása nélküli enzimatikus mechanizmust tartalmaz. Ez az enzim citrikus (citrát-oxalacetát-liáz) vagy citrát-desmoláz. A reakció egy kétértékű kation jelenlétét igényli, amely ebben az esetben a magnéziumot biztosítja.

A reakció oxaloacetátot és piruvátot képez, amely a nitrogénforrás alkalmazásával képződött alkáli pH-érték közepén szerves savakat eredményez. Ezeket a szerves savakat szénforrásként alkalmazzák, karbonátokat és hidrogén-karbonátokat képezve, továbbá a tápközeget lúgosítva.

Vetés üzemmód

A Simmons citrát-táptalajt egyenes hurok vagy tű segítségével enyhén be kell oltani a halakba, és 24 órán át inkubálni 35-37 ° C-on. Az idő végén az eredmények figyelhetők meg.

A vetést csak az agar felületén végezzük. Ne tegyen szúrást.

értelmezés

Ha a közeg eredeti színe (zöld) és nincs látható növekedés, akkor a vizsgálat negatív, de ha a közeg kékre változik, az a lúgos termékek jelenlétét jelzi, amelyet a pH-mutató mutat. Ebben az esetben a teszt pozitív.

Ez azért fordul elő, mert ha a baktérium a citrát szénét használja, akkor képes az ammóniát felszabadító ammónium-foszfát nitrogénjét is bevenni, a táptalajt lúgosítva..

Másrészt, ha a táptalajban megfigyelhető a baktériumok növekedése, de nincs változás a színben, akkor a tesztet is pozitívnak kell tekinteni, mivel ha növekedés van, akkor azt jelenti, hogy a baktériumok szén-forrásként citrátot használhatnak, bár jelenleg nincs pH-változás (néha előfordulhat).

Ha kétség merül fel a végső szín értelmezésében, akkor összehasonlítható a beoltatlan citrát csőjével.

előkészítés

Mérjünk le 24,2 g dehidratált közeget egy liter vízhez. Keverjük össze és hagyjuk kb. 5 percig állni. A táptalajt feloldjuk 1 vagy 2 percig tartó melegítéssel, gyakran keverve.

4 ml-t tálalunk kémcsövekben és autoklávozzuk 121 ° C-on 15 percig. Az autokláv elhagyásakor a támaszték segítségével úgy döntse el, hogy az agar fuvola csúcsként megszilárdul, kis csípéssel vagy alul, és több ferdén.

A citrát közeg végső pH-ja 6,9 (zöld). Ez a közeg nagyon érzékeny a pH-változásra.

PH = 6 vagy annál kisebb, a közeg sárgára változik. A baktériumokkal végzett vizsgálat során ez a szín nem figyelhető meg.

A pH értéke 7,6 vagy annál magasabb, a közeg intenzív poroszkékre változik.

használat

A Simmons citrát agart bizonyos mikroorganizmusok, különösen az Enterobacteriaceae családba tartozó bacillák és más glükóz-nem fermentáló bacillák azonosítására használják..

Végső megfontolások

A Simmons citrát közeg nagyon kényes teszt, mivel bizonyos hibák esetén hamis pozitív eredményeket lehet elérni.

A következő gondossággal kell eljárni:

oltóanyag

Ne készítsen nagyon vastag vagy betöltött baktérium-inokulumot, mert ezáltal az ültetési helyszínen egy sárga színű szín alakulhat ki, a tápközeg többi részének befolyásolása nélkül, de a növekedés meggyőződéséhez vezethet. Ugyanez nem jelenti a teszt pozitivitását.

Hasonlóképpen, egy vastag inokulum hamis pozitív eredményt hozhat, mert a halvány baktériumok sejtfalain belüli előformált szerves vegyületek eléggé kis szén-dioxidot és nitrogént szabadíthatnak fel a pH-mutató elfordításához.

Ezért az ideális az, ha a tűt a platina fogantyú helyett ültetjük, hogy elkerüljük a felesleges anyag felvételét.

beültetett

Másrészről, amikor a kérdéses mikroorganizmus azonosításához biokémiai tesztek akkumulátora kerül telepítésre, fontos, hogy a citrát-teszt legyen az első, amit beoltunk, hogy elkerüljük a fehérjék vagy szénhidrátok más közegből történő húzását..

Ilyen körülmények között lehetséges, hogy hamis pozitív eredményt kapjunk, mert ezek közül bármelyik véletlenül bevezetett anyag metabolizálódik és a pH változását okozhatja..

Egy másik módja annak, hogy elkerüljük az anyagok húzását, az a fogantyú jól égetése és új inokulum felvétele egy teszt és egy másik között.

Gondoskodni kell a kolónia megérintésekor az inokulum elvégzésére is, mivel el kell kerülni, hogy az agar egy részét a tenyészetből húzza, amelyből a baktériumok jönnek, a korábban ismertetett módon..

Ebben az értelemben Matsen, Sherris és Branson azt javasolja, hogy az inokulumot fiziológiás oldatban hígítsák be a citrát-vizsgálat beoltása előtt, hogy elkerüljék más szénforrások átvitelét..

Színintenzitás

Figyelembe kell venni, hogy a teszt pozitív pozitív hatásának színe a kereskedelmi ház függvényében változhat.

Továbbá vannak olyan mikroorganizmusok, amelyek pozitívan hatnak 24 órán keresztül, de vannak más törzsek is, amelyek 48 órát vagy annál hosszabb ideig tartanak ahhoz, hogy a pH megváltozzon..

referenciák

1. Mac Faddin J. (2003). Biokémiai vizsgálatok klinikai jelentőségű baktériumok azonosítására. 3. szerk. Szerkesztői Panamericana. Buenos Aires Argentína.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.
4. BD laboratóriumok BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Elérhető: bd.com
5. Laboratóriumok Britania. Simmons Citrate Agar. 2015-ben elérhető: britanialab.com
6. Valtek Diagnosztikai Laboratóriumok. Simmons Citrate Agar. 2016. Elérhető: andinamedica.com.