Agar CLED alapítvány, használat és előkészítés

az CLED agar (Cisztin-laktóz-elektrolit-hiányos) egy differenciált szilárd táptalaj, amelyet húgyúti fertőzések diagnosztizálására használnak. A tenyésztőközeg összetétele a húgyúti kórokozók jó növekedését szolgálja, és ideális a telepképző egységek (CFU) kvantifikálására..

A CLED tenyésztőközeg nem szelektív, mivel Gram-negatív és Gram-pozitív mikroorganizmusok is növekedhetnek benne. Ez azonban nem jelent problémát, mivel a legtöbb húgyúti fertőzést egyetlen mikroorganizmus típusú okozza.

Polimikrobiális fertőzések esetén 2 vagy 3 különböző baktérium érhető el, de nagyon ritka, és nagyrészt szennyezett minták..

A Gram-negatív baktériumok között, amelyek ebben a táptalajban növekedhetnek, a családba tartozó bacillák tartoznak Enterobacteriaceae és más bélben oldódó bacillák, az uropatogének a leggyakrabban izolálódnak a vizeletmintákban, a következők: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, többek között.

Hasonlóképpen, a Gram-pozitív baktériumok között, amelyek ebben a táptalajban növekedhetnek, vannak Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp. és még élesztőt is termelhetnek, mint a komplex Candida albicans.

A tápközeg kémiai összetétele miatt azonban nem teszi lehetővé bizonyos igényes, urogenetikus kórokozók, mint pl. Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, többek között.

index

• 1 A CLED agar alapítása
• 2 A CLED agar alapítása (Bevis)
• 3 Használat
  • 3.1 A vizeletminták vétele
  • 3.2 Értelmezés
  • 3.3 Azonosítás
• 4 Előkészítés
• 5 Referenciák

A CLED agar alapja

A CLED tenyésztő tápközeg húskivonat, kazein hasnyálmirigy-hidrolizátum és zselatin hidrolizátum. Ezek tápanyagokat biztosítanak az igénytelen baktériumok kifejlesztéséhez.

Cisztint is tartalmaz, ami egy olyan aminosav, amely lehetővé teszi a coliformák növekedését, és kisméretű.

Hasonlóképpen, a laktóz fermentálható szénhidrátot is tartalmaz, ezért ez a közeg differenciált; képes megkülönböztetni az erjedő baktériumokat a nem fermentáló laktóztól.

A fermentáló baktériumok savtartalmú savakkal, sárga kolóniákkal állítják elő a tápközeg pH-ját, míg a nem fermentáló baktériumok nem hoznak létre változásokat a közegben, ezért az eredeti agar színét, zöld színét veszik fel.

A fermentációs reakciót a pH-indikátor jelenlétének köszönhetjük, amely ebben a táptalajban brómtimol-kék.

Másrészt a közeg alacsony elektrolitkoncentrációja gátolja a nemzetség tipikus invazív növekedését Proteus, nevezték rajzáshatásnak. Ez előnyt jelent más eszközökkel szemben, mivel lehetővé teszi az UFC-k számolását, beleértve a Proteus nemzetség jelenlétét is..

Az elektrolitok alacsony koncentrációja azonban gátolja a nemzetség egyes fajainak növekedését Shigella, ez más hátrányt jelent.

A CLED agar alapja (Bevis)

Ennek a közegnek egy változata vagy módosítása van, amelyet Bevis készített, aki az eredeti fuchsin savösszetételt (Andrade indikátor) beépítette az eredeti összetételbe. A brómtimol-kékrel együtt hat, hogy megkülönböztesse a nem fermentáló baktériumok fermentációját.

A hagyományos és a módosított közeg közötti különbség a telepek által elfogadott szín. A laktóz-fermentáló baktériumok esetében a telepek vöröses narancssárga színt kapnak rózsaszín vagy piros halóval, míg a nem erjedő is kékes szürke..

alkalmazások

A CLED agart kizárólag a vizeletminták vetésére használják. E közeg használata különösen gyakori az európai laboratóriumokban, míg Amerikában kevésbé használják.

A minta összegyűjtésének meg kell felelnie bizonyos paramétereknek a megbízható eredmények elérése érdekében, beleértve a következőket:

• Nem vesz antibiotikumot a minta bevétele előtt.
• A vizeletet előnyösen a reggeli első órától kell bevenni, mivel koncentráltabb, ha nem lehetséges a mintákat invazív módszerekkel venni..
• Alaposan mossa le a nemi szerveket, mielőtt bevenné a mintát.
• Az első vizelési patakot dobja ki, majd helyezze a tartályt.
• 25–30 ml vizeletet kell összegyűjteni steril címkézett tartályokban.
• Azonnal vegye be a jéggel körülvett laboratóriumba.
• Az anyagot 2 órás kibocsátás előtt vagy 4 ° C-on hűtve kell tárolni legfeljebb 24 órán keresztül.

A vizeletminták vétele

A vizeletmintát 1:50-re kell hígítani.

Hígításhoz tegyünk 0,5 ml beteg vizeletét és hígítsuk fel 24,5 ml steril fiziológiai oldattal.

Mérjük meg a hígított vizelet 0,1 ml-ét és egy CLIG-táptalajon levő drigalski spatulával vetjük fel a felületet. Ez a telepek számlálására szolgáló vetés módszer. Ezért használják a vizeletmintákban, mivel az eredményeket CFU / ml-ben kell kifejezni.

A kapott telepek mennyiségi meghatározásához az alábbiak szerint járjunk el: számoljuk meg a lemez telepeit és szaporítsuk 10-gyel, majd 50-tel. Így kapjuk meg a vizelet CFU / ml mennyiségét..

értelmezés

100 000 CFU / ml feletti vizelet fertőzés számítása

1000 CFU / ml alatti számolás - Nincs fertőzés

1000-10 000 CFU / ml-kétes, lehetséges szennyeződés, ismételt mintavétel.

azonosító

A CLED-agaron termesztett telepeket Gram-ra kell állítani, és a mikroorganizmus morfotípusos tulajdonságaitól függően egy bizonyos szubkultúrát végzünk..

Például, ha ez egy Gram-negatív bacillus, akkor azt MacConkey-agarra vetjük, ahol a laktóz fermentációja vagy nem. Ezenkívül tápláló agar van csatlakoztatva az oxidáz teszt elvégzéséhez.

Abban az esetben, ha a gramm pozitív gramm pozitív kokszokat tár fel, akkor a sós mannit agarban és tápláló agarban szubkultúrázható. Az utóbbi esetben a kataláz tesztet végezzük. Végül, ha élesztőt észlelünk, azt egy Sabouraud agarra vetjük.

Számos laboratórium kiküszöböli a CLED tápközeg használatát, és inkább a vér agart, a MacConkey-t és a tápláló agart használja a vizeletminták vetésére..

előkészítés

Egy üvegben egy liter desztillált vízzel oldjuk fel 36,2 g porított CLED agart. 5 perces pihenés után melegítsük fel az újraszuszpendált agart, folyamatosan keverjük 1 percig.

Ezután sterilizáljuk 121 ° C-on 15 percig az autoklávban. Miután az idő lejárt, az eltávolításra kerül az autoklávból, és hagyjuk lehűlni, amíg el nem éri a 45 ° C hőmérsékletet. Ezt követően minden steril Petri-csészébe 15-20 ml-t szolgáltunk.

A szennyeződés elkerülése érdekében a lemezek kiszolgálására szolgáló eljárást lamináris áramlású motorháztetőben vagy a Bunsen égő előtt kell elvégezni..

A szolgáltatott lemezek megszilárdulnak, lemezbe helyezve megfordítva helyezkednek el, és hűtőszekrényben (2-8 ° C) tárolják a felhasználásig.

Az elkészített közeg végső pH-ja 7,3 ± 0,2 legyen.

referenciák

1. Ajánlások a húgyúti fertőzések mikrobiológiai diagnózisára. gyer. infectol.  2001; 18 (1): 57-63. Elérhető: scielo.org.
2. Panchi J. A húgyúti fertőzést okozó mikrobiális szer azonosítása a belső hólyag katéterezésen átesett betegekben. 2016-ban a klinikai laboratóriumban a Licentiate címet igénylő alapképzés. Ambato Műszaki Egyetem. Ecuador.
3. Laboratóriumok Britania. Fele CLED. Elérhető: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories Használati utasítás, CLED Agar. 2013 Elérhető: www.renylab.ind.br.
5. Kultivált laboratóriumok A mikrobiológia alap kézikönyve. Elérhető: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. A CLED agar opció a vizelet kultúrában. Prospektív és összehasonlító értékelés. Diagnosztikai Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Gyakorlati klinikai mikrobiológia. Cadizi Egyetem, 2. kiadás. UCA Kiadványok Szolgáltatása.