Az Agar alapfelszereltsége, előkészítése és felhasználása

az standard számla agar egy szilárd, nem szelektív tenyésztőközeg, amelyet az ivóvíz, a szennyvíz, a tejitalok mintáiban lévő aerob mikrobiális terhelés mennyiségi meghatározására terveztek. Ez a közeg PCA agar néven is ismert, az angol plate gróf Agarban. 1953-ban hozta létre Buchbinder, Baris és Goldstein.

A standard agar közeg élesztőkivonatból, tripteinből, glükózból, agarból és desztillált vízből áll. Ez a készítmény alapvető táplálkozási elemeket tartalmaz, amelyek lehetővé teszik a jelenlegi aerob mikrobiális terhelés kialakulását, nem igényes.

Mivel a tápközeg nem tartalmaz inhibitorokat, a baktériumok bármilyen korlátozás nélkül fejlődhetnek, így ideális az általános kolóniaszámhoz. A lemez mennyiségi meghatározási technikája azonban nem fogja észlelni az összes jelenlévő baktériumot, hanem csak azokat, amelyek képesek a normál vetésű agart érintő környezeti körülmények között növekedni..

Ebben az értelemben a lemez mennyiségi meghatározási technikája általánosan meghatározza az aerob mezofil típusú baktériumok mennyiségét, azaz azokat, amelyek 25 és 40 ° C közötti hőmérsékleten fejlődnek, optimális növekedési hőmérséklet mellett 37 ° C-on..

Ez a baktériumcsoport nagyon fontos, mert az ember számára a legtöbb patogén baktérium van.

Meg kell jegyezni, hogy néha érdekes lehet az élelmiszerben jelen lévő pszichofil baktériumok mennyiségének számszerűsítése. Ezek a baktériumok azok, amelyek alacsony hőmérsékleten fejlődnek (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

Hasonlóképpen, a termofil baktériumok, amelyek 50 ° C és 80 ° C közötti vagy annál nagyobb tartományban fejlődnek, fontosak lehetnek bizonyos típusú élelmiszerekben, mint például konzervek.

A mikrobiális mennyiségi meghatározást kolóniaképző egységekben (CFU) fejezzük ki grammonként vagy milliliterenként.

index

• 1 Alapítvány
• 2 Előkészítés
  • 2.1 A lemez öntési technikához
  • 2.2 Felületültetésre
• 3 Használja
  • 3.1 Lemez öntési technika (mélységbe vetve)
  • 3.2 A felszínre vetett technika
• 4 Minőségellenőrzés
• 5 Korlátozások
• 6 Referenciák

alapítvány

A standard számlálóközeg úgy van kialakítva, hogy lehetővé tegye a nem igényes aerob baktériumok kielégítő fejlődését, mivel az élesztőkivonat, a triphein és a glükóz biztosítja a szükséges tápanyagokat a jó mikrobiológiai fejlődéshez..

Másrészről, a közeg tiszta színnel és átlátszó megjelenéssel rendelkezik, ezért ideális a mély vetés módszerével kifejlesztett telepek megjelenítésére (öntés egy lemezre)..

Lehetőség van arra is, hogy a telepeket a felszíni vetés módszerével lehessen számolni Drigalski spatulával.

Amikor a mikrobiális terhelés magas, a vizsgált minta tizedes hígításait kell végezni a CFU-k számításához.

Meg kell jegyezni, hogy ezt az adathordozót az American Public Health Association (APHA) javasolja az aerob mezofilek számolásához..

előkészítés

Mérjünk be 23,5 g dehidratált közeget és oldjunk fel egy liter desztillált vízben. A keverék teljes feloldódásához gyakran melegíteni kell, amíg fel nem forad. A következő lépések az alkalmazandó vető technika függvénye.

A lemez öntési technikához

A vizsgálati csövekbe 12–15 ml-t adjon. Ezt követően autoklávban 121 ° C-on 15 percig sterilizáljuk. Hagyjuk függőleges állapotban egy blokk formájában megszilárdulni. Használatig hűtőszekrényben tárolandó.

Olvassa el a cue-t, amikor használni kívánja. Az olvasztás után tartsa vízfürdőben 44-47 ° C-on, miközben a mintákat készítik.

A felszíni ültetéshez

Sterilezzük a táptalajt autoklávban 121 ° C-on, majd 20 ml-t steril petri-csészékbe osztjuk. Használatig hagyjuk megszilárdulni, invertálni és hűtőszekrényben tárolni.

Használja fel a lemezeket. A közeg pH-jának 7,0 ± 0,2-nek kell lennie.

használat

A víz és az élelmiszer mikrobiológiai vizsgálata során az agar standard számot aerob mezofil számítási technikában alkalmazzuk. Szükség van az aerob mezofilek számlálására, mivel meghatározza a vizsgált minta egészségügyi minőségét.

Ennek a technikának a alkalmazása (ezt a közeget használva) lehetővé teszi az izolált telepek makroszkópos megjelenítését a mennyiségi meghatározás céljából.

Plakk öntési technika (mélységbe vetve)

-folyamat

A technika a következőkből áll:

1) Homogenizálja a mintát a jelen lévő baktériumok újraelosztása érdekében.

2) A kezdeti szuszpenziót steril injekciós üvegben vagy zacskóban hajtjuk végre, figyelembe véve a 10 g vagy 10 ml-es arányt 90 ml hígítószerben (10^-1).

3) A kezdeti szuszpenzióból a megfelelő tizedes hígításokat a minta típusától függően végezzük. Például: (10^-2, 10^-3, 10^-4). A hígításokat pepton vízzel vagy foszfát pufferrel készítjük.

Ehhez vegyük be a kezdeti szuszpenziót 1 ml-t, és tegyük 9 ml-es hígítószerbe, szükség esetén folytassuk a hígításokat, most 1 ml hígítással.^-2 és így tovább.

4) Vegyünk 1 ml-t minden hígításból, és tegyük üres steril Petri-csészékbe.

5) Adjunk mindegyik tányérhoz 12-15 ml-t a korábban leolvasztott és 44-47 ° C-ra beállított standard agar-agarból.

6) A lemezeket egyenletes forgómozgásokkal kell ellátni, hogy egyenletesen eloszlatjuk a mintát az agarra, és hagyjuk megszilárdulni.

7) Fordítsa meg a lemezeket és inkubálja 37 ° C-on aerobiosisban 24-48 órán keresztül.

8) Miután befejezte az időt, folytassa a lemezek vizsgálatát, és számolja a telepeket az azt lehetővé tevő hígításban. Úgy választják, hogy számítsuk azokat a lemezeket, amelyek 30 és 300 CFU között vannak.

A számlálást manuálisan lehet elvégezni, vagy a telepszámláló berendezés használható.

A minta milliliterenként megengedett értékei országonként eltérőek lehetnek az általuk szabályozott szabványok szerint.

-Az UFC számítása

Az általános számítás a következő képlet alapján történik:

Az eredményeket 1 vagy 2 számjegyben fejezzük ki, megszorozva a megfelelő 10 bázissal. Példa: ha az eredmény 16,545, akkor a harmadik számjegy alapján 17.000-re kerekítjük, és a következőképpen fejezzük ki: 1,7 x 10⁴. Most, ha az eredmény 16,436, akkor 16 000-re kerekítjük és 1,6 x 10-et fejezünk ki⁴.

A felületre ültetett technika

-folyamat

-0,1 ml közvetlen mintával oltjuk be, ha folyékony, kezdeti szuszpenzió 10^-1 vagy egymást követő hígítások 10^-2, 10^-3 stb., egy standard számláló agar lemez közepén.

-A mintát egyenletesen eloszlatja Drigalski spatulával vagy L-alakú üvegrúddal, majd hagyja állni 10 percig.

-Fordítsa meg a lemezeket és inkubálja aerobiosisban 37 ° C-on 24–48 órán keresztül.

-Folytassa a telepek számbavételével, válassza ki azokat a lemezeket, amelyek 20-250 CFU tartományban vannak.

-Az UFC számítása

A számításhoz a hígítási tényezőt alkalmazzuk, ami az inverz. A számot 2 számjegyre kerekítjük (a harmadik számjegy szerint kerekítve), és az alap 10-es teljesítményben fejezzük ki, például, ha a mintában hígítás nélkül 224 CFU számít (10^-1) 22 x 10 értéket jelent¹  UFC, de ha ez az érték 225, akkor 23 x 10¹ UFC.

Most, ha 199 CFU-t számol a hígításban 10^-3, 20 x 10 értéket jelent⁴ UFC, de ha ugyanezen hígításnál 153 CFU számít, akkor 15 x 10 értéket jelent⁴ UFC.

Minőségellenőrzés

A standard tenyésztő tápközeget ismert, hitelesített törzsekkel értékelhetjük, például: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.

Ha a tenyésztőközeg optimális körülmények között van, minden esetben kielégítő növekedés várható L. fermentum amelyek rendszeresen teljesíthetnek.

A tenyésztőközeg sterilitásának felméréséhez az elkészített tételek egy vagy két lemezét (be nem oltott) 37 ° C-on aerobiosisban 24 órán át inkubálni kell. Ez idő alatt a tápközeg növekedését vagy színváltozását nem szabad megfigyelni..

korlátozások

-Ne olvassa többször az agart.

-Az elkészített tápközeg akár 3 hónapig is tarthat, amíg hűtőszekrényben tárolják és fénytől védik.

-Ez a tápközeg nem alkalmas igényes mikroorganizmusokra, vagy anaerobokra.

referenciák

1. Gyógyszerek Országos Adminisztrációja Élelmiszer- és Orvosi Technológia (ANMAT). Élelmiszer mikrobiológiai elemzése, hivatalos analitikai módszertan, indikátor mikroorganizmusok. 2014 3. kötet. A következő címen érhető el: anmat.gov.ar
2. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories, S.A. Agar lemez gróf. 2009. Elérhető: http://f-soria.es
3. Laboratóriumok Conda Pronadisa. Agar standard módszerekhez (PCA) az APHA és az ISO 4833 szerint. Elérhető: condalab.com
4. Laboratóriumok Britania. Számlálás agar lemezen. 2015-ben elérhető: britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B és Velázquez O. 2009. Az élelmiszerek mikrobiológiai elemzésének módszerei. 2nd ed. Kémiai Kar, UNAM. Mexikóban. Elérhető: depa.fquim.unam