Agar EMB alapítás, előkészítés és használat



az EMB agar szelektív és differenciált szilárd táptalaj, amelyet Gram-negatív bacillák, főként az Enterobacteriaceae család és más nem igénylő Gram-negatív bacillák izolálására használnak. Az EAM rövidítéssel is ismert, ami eozin-metilén-kék.

Ezt a közeget Holt-Harris és Teague készítette 1916-ban. Peptont, laktózt, szacharózt, dikálium-foszfátot, agart, eozint, metilén-kéket és vizet tartalmaz. Nagyon hasonlít a MacConkey agarhoz, különösen, ha a Levine által módosított EMB agart használjuk, amely nem tartalmaz szacharózt.

Valójában minden laboratórium eldönti, hogy működik-e az egyik vagy a másikval, mivel ugyanazzal a funkcióval rendelkeznek, bár biokémiailag eltérőek..

A Proteus nemzetséghez hasonlóan a klasszikus MacConkey-agarhoz hasonló hátránya is van. Ezért a jelenség elkerülése érdekében az agar koncentrációját akár 5% -kal növelheti..

index

  • 1 Alapítvány
    • 1.1 Szelektív
    • 1.2
  • 2 Előkészítés
  • 3 Használat
  • 4 Minőségellenőrzés
  • 5 Végső megfontolások
  • 6 Referenciák

alapítvány

szelektív

Az EMB agar finoman szelektív, mivel az anilinikus festékeket (eozin és metilén-kék) tartalmazza, amelyek gátlóként hatnak, megakadályozzák a legtöbb Gram-pozitív baktérium és néhány igényes Gram-negatív bacilli növekedését..

Ennek az agarnak azonban az a hátránya, hogy egyes Gram-pozitív baktériumok képesek ellenállni a gátló anyagok jelenlétének, és kis színtelen, ponty alakú telepekként növekszik, például Enterococcus faecalis és néhány Staphylococcus.

Növekedhet bizonyos élesztőket, például Candida albicans komplexum, Nagyon kis rózsaszínű telepeket fog adni. Még a chlamydosporok is kialakulhatnak ebből az élesztőből, ha a mintát mélységbe vetik.

differenciális

Másrészről az EMB agar is differenciált tápközeg, mivel ezek a színezékek együtt (eozin és metilén-kék) savanyú pH-nál csapadékot képeznek, ezért ezek előállításának indikátorai..

Ezért a gyengén erjedő laktóz- vagy szacharózbaktériumok lila kolóniákat hoznak létre 24-48 óra alatt. Például a Klebsiella, Enterobacter és Serratia nemzetség.

Azok a baktériumok, amelyek erősen fermentálják a laktózt, például Escherichia coli, vagy szacharóz, mint Yersinia enterocolitica vagy Proteus penneri, egy zöldes fekete csapadékot képez, amely fémes fényt kölcsönöz ezeknek a fajoknak.

Meg kell jegyezni, hogy ha az EMB levin táptalajt használják (szacharóz nélkül), Yersinia enterocolitica és Proteus penneri átlátszó telepeket termelnek.

A laktózt vagy szacharózt nem fermentáló baktériumokat olyan peptonok táplálják, amelyek a bakteriális fejlődéshez szükséges aminosavakat és nitrogént biztosítják, és átlátszó telepeket termelnek. Például a Salmonella és a Shigella nemzetségek, többek között.

Hasonlóképpen fontos megjegyezni, hogy az Acinetobacter nemzetség levendula-kék telepeket mutathat be, bár nem laktóz-, sem szacharóz-fermentor, de tulajdonsága, hogy metil-kéket rögzít a sejtfalában. Ez más oxidatív baktériumok esetében is előfordulhat.

előkészítés

Az eredeti dehidratált közeg világos bézs.

A tenyésztőközeg előállításához 36 gramm dehidratált tápközeget kell mérni és egy liter desztillált vizet tartalmazó injekciós üvegben szuszpendálni..

Miután a keveréket 5 percig hagyjuk pihenni, húzzuk a fiolát egy hőforráshoz, erőteljesen és folyamatosan keverjük, amíg fel nem forr, és teljesen feloldódik..

Ezt követően az oldott tenyésztőközeget az autoklávot 121 ° C-on 15 percig sterilizálni kell.

Az idő végén az autoklávból eltávolítjuk, és rövid időre hagyjuk pihenni. Ezután minden steril petri-csészében 15-20 ml agart is melegítünk (45-50 ° C). A közegnek kék litmusnak kell lennie.

A tálcák felszolgálása után kissé fedetlen marad, amíg az agar kicsit lehűl. Ezután lefedik és teljesen megszilárdulnak. Később fordított plaketttartóba rendezik, és hűtőszekrényben (8 ° C) tárolják, amíg fel nem használják.

Ezt az eljárást előnyösen lamináris áramlású motorháztetőben vagy a Bunsen égő előtt végezzük a szennyeződés elkerülése érdekében.

Fontos szem előtt tartani, hogy minden kereskedelmi ház jelzi, hogy milyen mennyiségben kell mérni a tenyésztőközeget.

A közeg végső pH-ja 7,2 ± 0,2 legyen

alkalmazások

Ezt a táptalajt vizelet és ürülék vagy bármilyen klinikai minta vetésére használják, különösen akkor, ha gyanús Gram-negatív bacillák jelenléte, mint például az Enterobacteriaceae családba tartozó bacillák, amelyek ebben a táptalajban nagyon jól fejlődnek.

A Shigella és Salmonella nemzetségek enteropatogén baktériumait színtelen vagy enyhén borostyán telepek jellemzik..

Más nem fermentáló laktózbacillák is nőnek, például Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter..

Hasonlóképpen, ez a tápközeg nagyon hasznos az élelmiszer és a víz mikrobiológiai elemzésében, mivel ideális a coliformák meghatározásának teljes megerősítő fázisához, vagyis annak igazolásához, hogy jelen van a coliformák. E. coli zavaros EC-húslevesekből, a legvalószínűbb számtechnikából (NMP).

Minőségellenőrzés

Annak ellenőrzésére, hogy az újonnan tenyésztett tápközeg jól működik-e, a kontroll törzsek beültethetők a telepek jellemzőinek megfigyelésére és annak igazolására, hogy a várakozások szerint.

Ehhez az ATCC törzsek vagy a jól azonosított törzsek E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa és néhány Gram-pozitív baktérium S. aureus.

Ez várható E. coli Jól fejlett kékes-fekete kolóniákat készíthetünk zöld fémes csillogással. Mindaddig, amíg, Enterobacter aerogenes és Klebsiella sp jól fejlett nyálkahártyákat kell adni kékes-fekete színnel.

A maga részéről, Salmonella typhimuriumra és Shigella flexneri, nagy kolóniákat kell kialakítaniuk, színtelen vagy enyhén borostyán színnel.

Végül a műfaj Pseudomonas aeruginosa színtelen, szabálytalan méretű telepekké nő, míg a Gram-pozitív baktériumoknak nagyon kis kolóniákkal kell teljesen gátolniuk vagy megnőniük..

Végső megfontolások

Néha a sterilezés csökkenti a metilén-kéket, figyelve a narancssárga közeget. Annak érdekében, hogy a metilén-kék oxidálódjon és a lila szín helyreálljon, óvatosan kell keverni, amíg a szín vissza nem tér.

A sterilizálás után is kicsapódhat a festék, ezért a Petri-csészék tálalása előtt jól kell keverni.

referenciák

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B és Velázquez O. 2009. Az élelmiszerek mikrobiológiai elemzésének módszerei. 2nd ed. Kémiai Kar, UNAM. Mexikó.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. A törzsek jellemzése és eloszlása Escherichia coli Pototikusan patogén izolátumok a csirke brojlerekből a baromfi gazdaságokból Peruban. Rev. vet. Peru 2012 23 (2): 209-219. Elérhető: scielo.org.
  3. Laboratories Conda S.A. Eozin agar és metilénkék. 2010. Elérhető: condalab.com
  4. Laboratóriumok Britania. Levine E.M.B (Eosin és Metilén Kék) 2011. Rendelkezésre áll: britanialab.com
  5. BD laboratóriumok BD EMB agar (Eosin-metilén-kék agar), módosítva. 2013. Elérhető: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. (5. kiadás). Argentína, szerkesztő Panamericana S.A..
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Argentínában. Panamericana S.A szerkesztő