Agar Endo alapítvány, előkészítés és használat

az Endo agar vagy közeg Endo egy szilárd, differenciált tenyésztőközeg, amely bizonyos fokú szelektivitással rendelkezik. Az eredeti képletet az Endo 1904-ben hozta létre, hogy megkülönböztesse a laktóz-fermentáló baktériumokat a nem fermentáló baktériumoktól. Kezdetben úgy tervezték, hogy elkülönítse Salmonella typhi, de később a médium célja a koliformák keresése.

Az Endo agar elve fennmaradt, de az évek során számtalan változáson ment keresztül. Jelenleg a közeg peptidekkel emésztett állati szövetből, laktózból, dikálium-hidrogén-foszfátból, nátrium-szulfitból, bázikus fukszinból és agarból áll..

A közeg fő felhasználása az Enterobacteriaceae családba tartozó Gram-negatív bacillák és más közeli családok izolálásához és differenciálódásához kapcsolódik..

Hosszú ideig a kolibaktériumok kimutatására használták fel a vízben, tejtermékekben és élelmiszerekben, de manapság a médiumok használatát mások hasonló funkciókkal helyettesítették. Egyes mikrobiológiai laboratóriumok azonban ezt az agart használják az Enterobacteriaceae klinikai eredetű minták izolálására.

index

• 1 Alapítvány
• 2 Előkészítés
  • 2.1 Endo agar
  • 2.2 Az agar m-Endo változata
• 3 Használja
• 4 Minőségellenőrzés
• 5 Korlátozások
• 6 Referenciák

alapítvány

Az Endo agar olyan peptonokat tartalmaz, amelyek aminosavak, nitrogén, szén és energiaforrásként szolgálnak, és amelyek szükségesek a nem kívánt mikroorganizmusok növekedéséhez..

Másrészt az agar enyhén szelektív jellegét nátrium-szulfit és bázikus fukszin hozzáadásával biztosítjuk; mindkét komponens részben vagy teljesen gátolja a legtöbb Gram-pozitív baktérium fejlődését.

A differenciál karaktert a fermentálható szénhidrát jelenléte adja, amely ebben az esetben a laktóz és az alapfukszin, amely szintén a pH-érték indikátoraként szolgál..

A Gram-negatív baktériumok, amelyek ezen az agaron nőnek és képesek laktózt erjeszteni, erős rózsaszín kolóniákat alkotnak; az. \ t Escherichia coli sötétvörös kolóniák képződése zöld fémes ragyogással. Ennek oka a szénhidrát erjedéséből származó savak magas termelése.

Meg kell jegyezni, hogy a telepek körüli közeg erős rózsaszín színűvé válik. Míg a nem fermentáló laktóz gram-negatív bacillák halvány rózsaszínű telepeket képeznek, amelyek közepes vagy színtelenek.

A dikálium-hidrogén-foszfát egyensúlyba hozza a közeg pH-ját, és az agar a szilárd konzisztenciát biztosító komponens.

előkészítés

Endo Agar

Mérjünk fel 41,5 g dehidratált közeget, és 1 liter desztillált vízben oldjuk. Az elegyet rendszeresen keverjük, amíg a közeg teljesen fel nem oldódik. Sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 15 lb nyomáson 15 percig.

Az autoklávból történő eltávolítás után hagyjuk lehűlni körülbelül 45-50 ° C hőmérsékletre, rázzuk össze a keveréket, mielőtt a tálalás előtt homogenizálnánk. Öntsünk 20 ml-t steril Petri-csészébe.

Hagyja, hogy a tányérok megszilárduljanak, fordítsák meg és tárolják egy dobozban, vagy tárolják sötét papírral, mielőtt hűtőszekrényben tárolják. Nagyon fontos, hogy az előkészített közeget közvetlen fénytől védjük. Az ajánlott gyakorlat az, hogy előkészítse a pontos összeget, amelyre szükség lesz.

Hűtőszekrényben tárolva a lemezeket használat előtt le kell temperálni.

A közeg pH-jának 7,2 és 7,6 között kell lennie, és az előkészített közeg színe halvány rózsaszín..

Változat agar m-Endo

Az Endo agar (m-Endo) egy másik változata, amely a McCarthy, Delaney és Grasso képletét követi, amely több vegyületet tartalmaz és változik az előkészítés módjában..

Ez a variáns tartalmaz: laktózt, triptózot, kazein enzimatikus emésztését, állati szövet enzimatikus emésztését, nátrium-kloridot, kétbázisú kálium-foszfátot, nátrium-szulfitot, élesztőkivonatot, kálium-foszfát-monobázisos, bázikus fukszint, nátrium-dezoxikolátot, lauril-szulfátot nátrium és agar.

Ebben az esetben 51 g dehidratált közeget mérünk, és 1 liter desztillált vízben, 20 ml etanolt tartalmazó szuszpenzióban szuszpendáljuk..

Keverés közben kissé melegítsük, amíg a közeg teljesen fel nem oldódik. Ne melegítse túl és ne sterilizáljon autoklávban. Miután a keverék homogén, steril petri-csészékben tálaljuk és hagyjuk megszilárdulni.

használat

Néhány országban még mindig használják a teljes és a széklet coliformák víz- és élelmiszermintákban történő számlálására, különösen a \ t Escherichia coli mint a székletszennyezés fő mutatója.

Az M-Endo agart az American Public Health Association (APHA) ajánlja a fertőtlenítő és szennyvízkezelő programok nyomon követésére és ellenőrzésére, valamint az ivóvíz minőségének értékelésére..

A leggyakrabban alkalmazott módszer a membránszűrés, miután a mintát Lauril-szulfáttartalommal 2-4 órán át dúsítottuk..

Alkalmazható az EMB agar helyettesítésére az élelmiszer és a víz mikrobiológiai elemzésében a legvalószínűbb számtechnikával (NMP), különösen a teljes megerősítő fázisban, hogy megerősítsük a jelenlétet. E. coli zavaros EC-húslevesekből.

Minőségellenőrzés

Az elkészített Endo agar-tétel minőségének értékeléséhez ismert vagy tanúsított kontrolltörzseket vetünk be.

Az erre a célra használható törzsek közé tartoznak: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 és Enterococcus faecalis ATCC 11700.

A törzseket kimerüléssel vetjük és 37 ° C-on inkubáljuk 24 órán át aerobiosisban.

A várt eredmények:

• hogy Escherichia coli: erősen vörös színű telepek, fémes ragyogással.
• hogy E. cloacae és K. pneumoniae a telepeknek rózsaszín nyálkahártyának kell lenniük.
• S esetében. typhimurium, S. flexneri és P. mirabilis a telepek általában halvány rózsaszín vagy színtelenek.
• végül, E. faecalis várhatóan részlegesen gátolódik, ezért a növekedésnek gyengenek kell lennie, nagyon kis, erős rózsaszínű telepekkel.

korlátozások

-Az Endo tápközeg alacsony szelektív erővel rendelkezik, ezért előfordulhat, hogy egyes Gram-pozitív mikroorganizmusok, mint például Staphylococcus, Enterococcus és még élesztők is nőhetnek.

-Más bacillák, amelyek nem tartoznak az Enterobacteriaceae családba, ebben a táptalajban fejlődhetnek, mint például Pseudomonas sp és Aeromonas sp. Ezeknek a törzseknek a jellemzői színtelen, szabálytalan telepek.

-Ez az előkészített közeg nagyon érzékeny a fényre, ezért hosszabb ideig tartó expozíciója rontja a mutatórendszert, visszafordíthatatlanul károsítja a közeget..

-A közeg összetevőit rákkeltőnek tekintik, ezért a közvetlen érintkezést el kell kerülni.

-A dehidratált tápközeg nagyon higroszkópos, és az eredeti tartályban szobahőmérsékleten, szorosan zárva és száraz környezetben kell tartani..

referenciák

1. BD laboratóriumok Endo Agar. 2013. Elérhető: bd.com
2. Neogen Laboratories M Endo Agar. Elérhető: foodsafety.neogen.com
3. "Agar Endo." Wikipédia, A szabad enciklopédia. 2017. szept. 7., 08:27 UTC. 2019. február 28., 22:55. Elérhető: en.wikipedia.
4. MercK laboratórium. Endo agar 2019. Rendelkezésre áll: merckmillipore.com
5. Laboratóriumi műszaki lap. M -Endo Agar LES. 2015. Elérhető: liofilchem.net