Agar Hektoen alapítvány, előkészítés és felhasználás

az Hektoen agar vagy enterális Hektoen agar szilárd, szelektív és differenciált táptalaj. A Hektoen Intézetben a király és Metzger a Shigella és Salmonella nemzetségbe tartozó baktériumok izolálására jött létre..

A tápközeg proteóz peptonból, élesztőkivonatból, epesókból, laktózból, szacharózból, szalicinből, nátrium-tioszulfátból, nátrium-kloridból, vas-citrátból, ammónium-citrátból, brómtimol-kékből, savfukszinból és agarból áll. Ez a készítmény lehetővé teszi, hogy megkülönböztessük a Shigella és Salmonella nemzetségeket a baktérium többi részéből, amelyek képesek ebben a táptalajban növekedni.

Bár a Hektoen agarhoz hasonlóan más eszközök is léteznek, ez nagyobb előnyhöz vezet más eszközökhöz képest, különösen akkor, ha Shigella fajokat kíván helyreállítani.

A fertőzött élelmiszerek fogyasztása miatt mindkét nemzetség faja súlyos gyomor-bélrendszeri problémákat okoz; ezért az átvitel széklet - orális. Ezért a Hektoen agar alkalmazása főként a széklet és az élelmiszerminták mikrobiológiai elemzésében szerepel..

index

• 1 Alapítvány
• 2 Előkészítés
• 3 Használja
• 4 Minőségellenőrzés
• 5 Korlátozások
• 6 Referenciák

alapítvány

A Hektoen agar tápanyagok forrásaként peptonokat és élesztőkivonatot tartalmaz, amely a mikrobiális fejlődés alapvető elemeit biztosítja..

Ugyanakkor epe-sóknak is van szerepe, amelyek bizonyos baktériumok, különösen a Gram-pozitív és néhány Gram-negatív növekedését gátolják. Ezért szelektív közegnek tekintik.

Másrészt a Hektoen agar differenciált közeg. Ezt a tulajdonságot a fermentálható szénhidrátok, például a laktóz, a szacharora és a szalicin jelenléte adja meg a pH indikátor rendszerrel együtt, amelyet brómtimol-kék és savas fuchsin képvisel..

A Salmonella és Shigella nemhez tartozó valamennyi táptalajon képes baktériumok lazac- vagy narancssárga telepeket fejlesztenek ki a Proteus nemzetség kivételével. Ez annak köszönhető, hogy egy vagy több jelenlévő szénhidrát fermentálódik, ami savanyítja a táptalajt, ami a pH-jelző fordulásához vezet..

A Shigella és Salmonella nemzetségek nem képesek a jelen lévő szénhidrátok egyikére fermentálni, csak a peptonokat használva energiaforrásként, amely lúgosítja a környezetet, és ezért a telepek kék-zöldek.

Ebben a közegben megkülönböztethetőek a hidrogén-szulfid képződésére képes baktériumok (színtelen gáz). A nátrium-tioszulfát kénforrásként működik, míg a vas-citrát a feltáró szer. Mindkét vegyület lehetővé teszi a vas-szulfid fekete csapadék képződését, amely a reakciót bizonyítja.

A kolónia közepén levő fekete csapadék egy átlátszó halóval körülvevő halak szemét megjeleníti. Ez a jellemző a Salmonella nemzetség jelenlétére utal.

Végül a nátrium-klorid fenntartja az ozmotikus egyensúlyt, és az agar szilárd anyagot ad a közegnek.

előkészítés

Mérjünk le 76 g dehidratált táptalajt és oldjunk fel egy liter desztillált vízben. Az elegyet erőteljesen rázzuk fel, majd hagyjuk 10-15 percig hagyni. Fűtésre és főzésre alkalmas, forgó mozgásokat biztosítva a teljes feloldódásig. Ez a közeg nincs autoklávozva.

Amikor a közeg körülbelül 45 ° C-os hőmérsékletet ér el, 20 ml térfogat közvetlenül öntjük steril Petri-csészékbe..

Az agar megszilárdul. Ekkor készen állnak a használatra. Javasoljuk, hogy azonnal használja őket. Ha nem lehetséges, azokat hűtőszekrényben kell tartani, amíg fel nem használják.

A lemezeket korán el kell távolítani a hűtőszekrényből, mielőtt beültetnék őket szobahőmérsékletre.

A közeg pH-ja 7,5 ± 0,2 legyen. A dehidratált közeg színe lila és előkészített barnászöld.

használat

A Hektoen agar használata ajánlott a Shigella és Salmonella nemzetség baktériumainak székletben és élelmiszermintákban történő kereséséhez..

Ezeknek a baktériumoknak az elkülönítésének lehetősége jelentősen megnő, ha a mintát előzetesen speciális húslevesekben, például szelén-levesben, szelenit cisztin-táptalajban, tetrathionát-táptalajban stb..

Az inokulumnak erősnek kell lennie, és a magvetést fúrással kell végezni. A lemezeket 37 ° C-on inkubáljuk 24-48 órán át aerobiosisban.

Az inkubálást 48 órán át ajánljuk, mivel a kolóniák jellemzői egyértelműbbek a tolmácsoláshoz és a differenciálódáshoz.

Minőségellenőrzés

Ezen közeg minőségellenőrzéséhez tanúsított baktériumtörzseket használnak, mint például: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 és Shigella sonnei ATCC 25931.

A várt eredmények a következők: Salmonella typhimurium és  Salmonella enteritidis zöld-kék telepeket kell kiépíteniük fekete központtal vagy anélkül. Míg a Shigella fajok kék-zöld telepekként fognak növekedni.

Ön is tartalmazhat törzseket Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 és Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Ezekben az esetekben a megfigyelt jellemzők a következők: E. coli és K. pneumoniae Ebben a táptalajban lazac-narancssárga kolóniákat alakítanak ki, a körülöttük azonos színű csapadékkal. Eközben a Proteus kék-zöld telepeket alakít ki fekete központtal vagy anélkül.

míg S. aureus és  E. faecalis néha gátolni kell E. faecalis sárga telepekként nő, nagyon kicsi.

Másrészt, mivel ezt a közeget nem sterilizáljuk autoklávban, fontos a közeg sterilitásának értékelése. Ezért minden elkészített adagot 1-2 lemezre kell inkubálni anélkül, hogy az aerobiosisban 37 ° C-on 24 órán át beoltnánk..

Nyilvánvaló, hogy a lemezen semmilyen növekedés nem várható.

korlátozások

-A Proteus fajok fejlődhetnek ebben a környezetben, és kolóniájuk jellemzői összetéveszthetők a Salmonella vagy a Shigella fajokkal. Ezért minden gyanús kolóniát biokémiai vizsgálatokkal kell megerősíteni.

-Ehhez a tápközeghez más kevésbé szelektív agarokkal kell együtt járni, mert ha a keresett mikroorganizmust alacsony koncentrációban találjuk meg, előfordulhat, hogy ebben a közegben nem alakul ki..

-Ne készítsen túlmelegedést az elkészítés során, mivel a túlzott hő megváltoztatja a közeg összetételét.

-A szokatlanul laktóz-fermentáló Salmonella telepek észrevétlenek lehetnek.

referenciák

1. Wikipédia közreműködők. Hektoen enterális agar. Wikipédia, The Free Encyclopedia. 2019. március 13., 23:38 UTC. Elérhető: .wikipedia.org / Hozzáférés 2019. március 16-ig.
2. BD laboratóriumok BD Hektoen enterikus agar (HE Agar). 2013. Elérhető: bd.com
3. Laboratóriumok Britania. Hektoen enterális agar. 2015-ben elérhető: britanialab.com
4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Agar Hektoen agar. Elérhető: f-soria.es
5. Difco & BBL kézikönyv, Hektoen enterikus agar. 2. kiadás. Elérhető: bd.com/europe