Agar LIA (lizin vas) alapozás, előkészítés és felhasználás

az LIA agar (Lizin Iron) egy biokémiai vizsgálat, amelyet az Enterobacteriaceae család baktériumainak azonosítására használnak. Ezt a médiumot Edwards és Fife hozta létre, a Falkow képlete alapján.

Eredetileg ez a teszt peptont, élesztőkivonatot, glükózt, L-lizint, bróm-krezolt lila és desztillált vizet tartalmazott. Edwards és Fife agar-agart, vas-ammónium-citrátot és nátrium-tioszulfátot adtak hozzá.

A vizsgálat lényegében a lizin-dekarboxiláz enzim jelenlétének kimutatására szolgál, amely képes az L-lizin aminosav karboxilcsoportjával reagálni. Az aminosav dezaminálása is előfordulhat a lizin-deamináz enzim jelenléte miatt.

Ezen túlmenően a tápközeg összetétele lehetővé teszi egyes baktérium-nemzetségek hidrogén-szulfid előállításának képességét. Végül, a közepén is megfigyelhető a gáz generációja.

index

• 1 Alapítvány
  • 1.1. Peptonok és élesztőkivonat
  • 1.2 Glükóz
  • 1,3 L-lizin
  • 1.4 pH-indikátor (bromokrezol-lila)
  • 1.5 Ammónium-vas-citrát és nátrium-tioszulfát
• 2 A vizsgálat értelmezése
  • 2.1 A lizin dekarboxilezése
  • 2.2 A lizin dezaminálása
  • 2.3. A hidrogén-szulfid (H2S) előállítása
• 3 Az eredmények rögzítése
• 4 Előkészítés
• 5 Felhasználások
• 6 Referenciák

alapítvány

Peptonok és élesztőkivonat

A legtöbb táptalajhoz hasonlóan a vas-lizin agar olyan komponenseket is tartalmaz, amelyek a baktériumok növekedéséhez szükséges tápanyagok forrását képezik. Ezeket az összetevőket peptonok és élesztőkivonat képviseli.

szőlőcukor

Ez az agar fermentálható szénhidrát-glükózt is tartalmaz. Ismeretes, hogy az Enterobacteriaceae család összes baktériuma glükózt fermentál.

Ez a lépés döntő fontosságú, mert felelős lesz a közeg savanyításáért, amely a lizin-dekarboxiláz enzim alapvető feltétele, ha jelen van, hogy a szubsztrátjára hatjon..

Néhány baktérium-nemzetségben megfigyelhető a glükóz fermentációjának köszönhető gáztermelés.

A gázt bizonyítják, amikor az agar a csőben eltolódik, és üres helyet hagy a cső alján, vagy a közeget két vagy több részre törjük..

L-lizin

Ha a lizint dekarboxilezzük, diamint (kadaverint) és szén-dioxidot képeznek.

A dekarboxilezés a piridoxál-koenzim-foszfát jelenlétében történik. Ez a reakció visszafordíthatatlan.

PH-indikátor (bromokrezol-lila)

A különböző reakciók által a tápközegben bekövetkezett összes pH-változást a bromokrezol-lila pH-indikátor detektálja.

Ebben az értelemben, ha savanyítás történik, a közeg sárgára változik, és ha lúgosítás történik, a közeg visszatér az eredeti lila vagy lila színhez.

Amikor a lizin dezaminálódását a lizin-dezamináz enzim jelenléte okozza, a felszínen vöröses szín alakul ki, jellemző a Proteus, Providencia és néhány Morganella fajra..

Ez annak a ténynek köszönhető, hogy a dezaminálás folyamán az alfa-keto-sav képződik, amely oxigén jelenlétében reagál az ammónium-citráttal, ami a fent említett színt okozza..

Ammónium-vas-citrát és nátrium-tioszulfát

Másrészt a hidrogén-szulfidot termelő baktériumokat nátrium-tioszulfát (kénforrás) és vas-ammónium-citrát jelenléte bizonyítja, amely a H fejlesztője.₂S.

A tioszulfát-reduktáz enzimmel rendelkező baktériumok képesek a jelen lévő nátrium-tioszulfát redukálásával, szulfit és hidrogén-szulfid képződésével (H₂S).

Ez utóbbi színtelen gáz, de amikor reagál a vas-sóval, fémes vas-szulfidot képez, amely oldhatatlan vegyület (látható fekete csapadék).

Azonban a H képződés kapacitása₂Ezzel a közeggel S nem nagyon megbízható, mivel néhány negatív lizin-dekarboxiláz baktérium képes H-t előállítani₂Az S nem képezi a fekete csapadékot, mert a közeg savassága zavarja. Ezért ajánlott más, vasat tartalmazó eszközökkel ellenőrizni.

A vizsgálat értelmezése

A lizin dekarboxilezése

A csöveket a 24 órás inkubálás befejezése után kell elolvasni, különben fennáll a veszélye a reakció félreértelmezésének, a hamis negatívok bejelentése.

Emlékeztetni kell arra, hogy az első reakció a glükóz fermentálása lesz, ezért a 10-12 óra elteltével a csövek sárgára változnak..

Ha az inkubációs periódus végén (24 óra) sárga, lila vagy lila felületű háttér látható, a reakció negatív. A felület lila színe megfelel a közeg lúgosításának peptonok alkalmazásával.

Pozitív reakció az, amelyben a cső alja és felülete teljesen lila, vagyis visszatér az eredeti színhez.

Ezért, aki meghatározza a teszt pozitivitását, a táptalaj alapja vagy alja. Ha kétségei vannak a színnel, összehasonlíthatja azt egy nem beoltott LIA csővel.

A lizin dezaminálása

A lizin dezaminációját bizonyító cső vörösesbarna felülettel és sárga háttérrel (savval), vagy az egész vörösesbarna csővel rendelkezik..

Ezt a reakciót negatívnak tekintjük a lizin dekarboxilezésére, de pozitív a lizin dezaminálására..

Ezt a reakciót a ferdén definiáljuk és értelmezzük.

Hidrogén-szulfid előállítása (H)₂S)

Pozitív reakciót figyeltek meg egy fekete csapadék megjelenése a közeg egészében vagy egy részében. Általában a kúpos határ és az alap között.

Ha a csapadék az egész csőben történik, nem mutatja a közegben fellépő egyéb reakciókat.

Az eredmények rögzítése

A vizsgálat értelmezésekor az eredményeket a következőképpen rögzítik:

Először olvassa el a ferde, majd az alsó vagy a taco-t, majd a H-t₂S, és végül a gáztermelés.

Példa: K / A + (-). Ez azt jelenti:

• K: Alkáli keret (lila)
• A: Savas (sárga) háttér, azaz negatív dekarboxilezési reakció és negatív deamináció.
• +: A hidrogén-szulfid előállítása
• (-): Gáz nélkül.

előkészítés

Mérjünk be 35 g lizin-agar dehidratált vasat és oldjunk fel egy liter desztillált vízben.

Melegítsük addig, amíg az agar teljesen fel nem oldódik. A táptalajt 4 ml-t elosztjuk 13/100 kémcsőben pamut fedéllel.

Sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 15 percig. Távolítsa el az autoklávból, és engedje meg, hogy leereszkedjen, oly módon, hogy mély alap és rövid ferde.

Hűtőszekrényben 2-8 ° C-on tárolandó. A baktériumtörzs beültetése előtt hagyjuk enyhíteni.

A dehidratált közeg színe bézs és a közepes vöröses lila színű.

Az elkészített közeg végső pH-ja 6,7 ​​± 0,2.

A tápközeg sárgára változik, pH = 5,2 vagy annál kisebb, és 6,5 pH-értéken lila.

alkalmazások

Ezt a vizsgálatot más biokémiai vizsgálatokkal együtt az Enterobacteriaceae családból származó bacillák azonosítására használják..

A táptalajt egyenes hurokkal vagy tűvel vetik be, a cső aljára egy vagy két ütést készítünk, majd a közeg felülete zigzaggált.

A reakcióelegyet 24 órán át 35-37 ° C-on inkubáljuk aerobiosisban. Ha szükséges, 24 órán át inkubálva marad.

Elsősorban hasznos negatív Citrobacter laktózfajok megkülönböztetése Salmonellas sp.

referenciák

1. Mac Faddin J. (2003). Biokémiai vizsgálatok klinikai jelentőségű baktériumok azonosítására. 3. szerk. Szerkesztői Panamericana. Buenos Aires Argentína.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.
4. Laboratóriumok Britania. Lizin vas-agar. 2015-ben elérhető: britanialab.com
5. BD laboratóriumok BBL lizin vas agar ferde. 2007. A következő címen érhető el: bd.com
6. Valtek Laboratories Medium L.I.A. 2009. Elérhető: andinamedica.com