Agar M.R.S alapítvány, előkészítés és felhasználás



az agar M.R.S. szelektív szilárd táptalaj, amelyet tejsavbaktériumok, különösen a Lactobacillus nemzetség izolálására és számlálására használnak. Ezt az agart 1960-ban Man, Rogosa és Sharpe hozta létre, a közepén ugyanaz a név, de összetettsége miatt gyakran használják az M.R.S rövidítést..

Ez áll a proteóz peptont, húskivonatot, élesztőkivonatot, glükózt, szorbitán-monooleát, dikálium-foszfát, nátrium-acetát, ammónium-citrát, magnézium-szulfát, mangán-szulfát és agar-agar.

Ez a kompozíció lehetővé teszi a tejsavbaktériumok megfelelő fejlődését a klinikai mintákból, például székletből, vaginális szekrécióból, szóbeli mintákból és az anyatejből, valamint a tej- és húsételekből..

A klinikai laboratóriumokban nem használják rutinszerűen, mert a tejsavbaktériumok ritkán vesznek részt a patológiás folyamatokban. Az M.R.S agar alkalmazása azonban gyakoribb az élelmiszer mikrobiológia területén..

Másrészt, ezt a közeget néhány kutatóközpont használja, amelynek célja a tejsavbaktériumok vizsgálata.

index

  • 1 Alapítvány
  • 2 Előkészítés
  • 3 Használat
    • 3.1 A telepek jellemzői
    • 3.2 A tejsavbaktériumok izolálása
    • 3.3 A tejsavbaktériumok számlálása
    • 3.4 Kutatási szinten
  • 4 Minőségellenőrzés
  • 5 Referenciák

alapítvány

Az agar Man, Rogosa és Sharpe meglehetősen összetett összetételű. Az egyes komponensek által betöltött funkció lebontásával magyarázható az alapja.

A fehérje-pepton, a húskivonat, az élesztőkivonat és a glükóz olyan tápanyagok, amelyek a baktérium-növekedéshez szükséges szén, nitrogén, vitaminok és ásványi anyagok forrását biztosítják. Emellett a glükóz az univerzális energiaforrás, amelyet a legtöbb táptalajban használnak.

Továbbá, a növekedés elősegítése tejsav baktériumok, szükséges a jelenléte a kofaktorok (kationok) nélkülözhetetlen az anyagcsere a Lactobacillus és a rokon baktériumok; ezek a vegyületek a nátrium-, magnézium- és mangán.

Hasonlóképpen, a szorbitán-monoleaát vagy a poliszorbát 80 fontos zsírsavak forrása, ha tápanyagként abszorbeálódik..

Ezenkívül a szorbitán-monolát és az ammónium-citrát úgy hat, hogy gátolja a kísérő növényvilág, különösen a Gram-negatív baktériumok kifejlődését, biztosítva ennek az agarnak a szelektív jellegét..

Végül az agar-agar az, ami a szilárd anyagot biztosítja a közegben.

Vannak más Man Rogosa Sharpe agarok változatai is; az egyik kiegészítjük cisztein (M.R.S.c), hasznos izolálására bifidobaktériumok, többek között más mikroorganizmusok. Sőt, ott van a MRS tápközegben, neomicin, paromomicin, nalidixinsav és lítium-klorid, különösen a szelektív száma bifidobaktériumok tejtermékek.

előkészítés

Mérjünk 68,25 gramm dehidratált közeget, és oldjunk fel egy liter desztillált vízben. Hagyjuk állni 5 percig. A teljes oldódás érdekében a hőforrást gyakran keverjük és forraljuk 1-2 percig. Sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 15 percig.

Ha elhagyja az autoklávot, hagyjon néhány percig állni, és még mindig meleg legyen a steril petri-csészékben.

Hagyja megszilárdulni, és fordítsa meg a lemezeket, rendelje meg a lemezeket és tárolja a hűtőszekrényben használatig. Használat előtt hagyja, hogy a lemezek szobahőmérsékletet vegyenek.

A közeg pH-ja 6,4 ± 0,2 legyen. Egyes kereskedelmi házakban a pH 5,5 és 5,9 között van.

A dehidratált közeg bézs színű és sötét színű borostyán.

A dehidratált közeget és az előkészített lemezeket 2-8 ° C-on kell tárolni.

alkalmazások

Az agarlemezeket M.R. a felszínre vethetők (kimerültség vagy Drigalski spatulája). A mélység is lehet. A lemezeket 37 ° C-on mikroaerofilben (4% O) kell inkubálni2 és 5-10% CO2) 24-72 órán keresztül.

A vetés módját a kívánt célnak megfelelően választjuk (elkülönítés vagy számlálás).

A telepek jellemzői

A Lactobacillus feltételezett kolóniái fehéresek, és nyálkahártyájú vagy krémes megjelenésűek ezen az agaron. Aztán azonosítaniuk kell.

A tejsavbaktériumok izolálása

Ebből a célból a felszíni ültetés történik. A telepítendő mintákhoz egy korábbi eljárás szükséges. 

Az anyatejminták esetében ajánlatos centrifugálni 1 ml-t 14 000 rmp-en 10 percig a zsírréteg eltávolítása érdekében. 900 μl-t dobunk ki, és a fennmaradó 100 μl-ben az üledéket szuszpendáljuk és az M.R. Ezután egyenletesen kell elosztani egy Drigalski spatulával.

Székletminták esetében egy (1) gramm székletet mérünk és 9 ml 0,1% -os steril peptonozott vízben homogenizálunk, ami 1/10 hígításnak felel meg. Ezután soros hígításokat készítünk, amíg a végső hígítást 10-re nem kapjuk-4.

Végül 100 μl hígításokat 10 vettünk-2, 10-3 és 10-4 és minden hígítást MRS agarra vittünk, egyenletesen elosztva egy Drigalski spatulával.

A tejsavbaktériumok számítása

Ebben az esetben a vetés mélységgel történik.

Az anyatej mintáira vegye be 1 ml-t, és tegye steril kúpos műanyag csőbe. MRS-agart adunk hozzá körülbelül 40 ° C hőmérsékleten 25 ml végső térfogatig, így homogén keveréket kapunk. Ezt követően steril petri-csészékbe öntjük és egyenletesen hagyjuk állni, amíg polimerizálódik..

A székletminták hígításait a fent leírtak szerint végezzük. Vegyünk 1 ml-t minden hígításból, és tegyük steril kúpos műanyag csövekbe. Az olvadt MRS agart 25 ml térfogatra adjuk.

Az egyes hígítások keverékét egyenletesen öntjük steril Petri-csészékbe. Végül hagyjuk állni a polimerizációig.

Kutatási szinten

Minden nap érdekesebbé válik a tejsavbaktériumok vizsgálata; különösen a kutatók arra törekszenek, hogy ismerjék meg az új törzseket és azok potenciálját, mint a tejtermékek gyártásában a szabványosítás kezdeményezését..

Ebben az értelemben Alvarado et al. (2007) az M.R. végezzen egy olyan tanulmányt, amelyben izolálták, azonosították és jellemezték a kézműves füstölt Venezuelai sajtban jelen lévő tejsavbaktériumokat.

A sajt megtalálták a baktériumok jelenléte a nemzetségek Lactococcus és Lactobacillus, és arra a következtetésre jutott, hogy az izolátumok keverékek alkalmasak, mint kiindulási törzsek a sajtgyártás pasztőrözött tejből.

Másrészről, Sánchez et al. (2017) M.R.S agarot használtunk. a tejsavbaktériumok jelenlétének vizsgálata a malacok emésztőrendszerében annak érdekében, hogy azokat natív probiotikumokként használják, amelyek növelik az egészséges malacok termelékenységét.

Ezzel a közeggel négy fajot sikerült elkülöníteniük: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae és Pediococcus pentosaceus.

Hasonlóképpen, Báez et al. (2019) M.R. a tejsavbaktériumok (BAL) és a bifidobaktériumok probiotikus potenciállal bíró értékelésére a csecsemők anyatejében és székletében.

Sikerült elkülöníteniük 11 BAL-t és 3-at Bifidobacteria sp az anyatejben, és 8 BAL és 2 Bifidobacteria sp. székletben Valamennyi olyan paramétert teljesített, amely probiotikus aktivitással rendelkező baktériumként akkreditálja őket.

A szerzők arra a következtetésre jutottak, hogy mind az anyatej, mind a kizárólag szoptatott csecsemők széklete a probiotikus baktériumok természetes forrásaként szolgál.

Minőségellenőrzés

Az M.R.S. kontrolltörzsek alkalmazhatók, például:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli és Bacillus cereus.

A várt eredmények kielégítő növekedést jelentenek az első 6 baktérium számára E. coli és Bacillus cereus teljes egészében le kell tiltani.

referenciák

  1. Alvarado C, Chacon Z, Otoniel J, Guerrero B, Lopez G. izolálása, azonosítása és jellemzése tejsavbaktérium sajt venezuelai Artisan füstölt Andino. Való felhasználása startertenyészettel. Elegendő. (Maracaibo) 2007 17 (3): 301-308. Elérhető: scielo.org.
  2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro laktát-baktériumok izolálása a malac emésztőrendszeréből. Rev. vet. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Elérhető: scielo.org.
  3. Baez E, González G, Hernandez G, Lopez E, Mega M. Értékelés tejsav baktériumok és Bifidobacterium probiotikus potenciálja az anyatejbe és a csecsemő széklet a városban Acevedo, Miranda 2017. Diplomamunka a mértéke diplomások biológiai vizsgálatok. University of Carabobo, Venezuela.
  4. Brit Laboratórium M.R.S agar. 2015-ben elérhető: britanialab.com
  5. Wikipédia közreműködők. MRS agar Wikipédia, The Free Encyclopedia. 2018. január 10., 19:44 UTC. Elérhető: wikipedia.org Hozzáférés 2019. február 17-ig.
  6. Roy D. Media a bifidobaktériumok izolálására és felsorolására tejtermékekben. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.