Agar Müeller Hinton alapítvány, előkészítés és felhasználás

az Müeller Hinton agar Ez egy szilárd, nem szelektív tápközeg, amely hús-infúzióból, kazeinsav-peptonból, keményítőből, agarból és desztillált vízből áll. Ez a közeg lehetővé teszi a leggyorsabban növekvő baktériumok kiváló mikrobiális fejlődését.

Eredetileg John Howard Müeller és Jane Hinton hozta létre a táplálkozásigényes baktériumok, például Neisseria gonorrhoeae és Neisseria meningitidis. Jellemzői miatt azonban ideálisnak bizonyult az antibiotikumokkal szembeni érzékenység vizsgálatára, megbízható és reprodukálható eredményeket adva.

Emiatt a Müeller Hinton agar a Klinikai és Laboratóriumi Standard Intézet (CLSI) és az Európai Antimikrobiális Érzékenységvizsgálati Bizottság által elfogadott tenyésztő táptalaj, a Kirby lemez diffúziós módszerrel végzett antimikrobiális érzékenységi vizsgálat elvégzésére. Bauer.

index

• 1 Alapítvány
• 2 Előkészítés
• 3 Használat
  • 3.1 Antimikrobiális technika
  • 3.2 A lemezek stratégiai elhelyezése a Müeller Hinton agaron
• 4 A hibás eredmények okai
• 5 Korlátozás
• 6 Minőségellenőrzés
• 7 Referenciák

alapítvány

Mivel nem szelektív tápközeg, kiválóan alkalmas a legtöbb patogén baktérium növekedésére.

Másrészt, az egyszerű összetétele megkönnyíti az anyagok diffúzióját, ami a diszfúziós módszerrel való érzékenységvizsgálat alapvető jellemzője..

Egy másik jellemzője, hogy kis mennyiségű inhibitorot tartalmaz, amely lehetővé teszi a szulfonamidok, a trimetoprim és a tetraciklinek hatékony értékelését..

Ugyanakkor szem előtt kell tartani, hogy a médiumnak meg kell felelnie bizonyos feltételeknek a megfelelő működés biztosítása érdekében, beleértve a következőket: \ t

PH-beállítás, agarmélység és megfelelő timin, timidin, Ca koncentrációja⁺⁺, mg⁺⁺ és Zn⁺⁺.

Azt is tudnunk kell, hogy a módszertan szabványos, ezért minden paramétert teljesíteni kell, például:

Az inokulum koncentrációja, az antibiotikus lemezek koncentrációja és megőrzése, a megfelelő számú lemez elhelyezése az agaron, egy lemez és egy másik távolság közötti távolság, egyes antibiotikumok stratégiai elhelyezése, a légkör, a hőmérséklet és a hőmérséklet. inkubáció.

előkészítés

Mérjünk be 37 g dehidratált Müeller Hinton táptalajt és oldjunk fel 1 liter desztillált vízben. Melegítsük a közeget keverés közben, hogy az feloldódjon. Hagyjuk forralni 1 percig.

Az autoklávot 121 ° C-on 15 percig sterilizáljuk. Az autoklávból való eltávolításkor a fiolát 50 ° C-os vízfürdőbe kell hűlni. Öntsünk 25-30 ml-t 10 cm átmérőjű steril Petri-csészékbe.

A lemezek átlagos vastagsága 4 mm (ideális), 3-5 mm-es tartományban.

Ha a vér agart kívánjuk előállítani Müeller Hinton agar bázissal, 5% -os steril és defibrinált bárányvért öntenek a tálcákon történő adagolás előtt..

A közeg végső pH-jának 7,2 és 7,4 között kell lennie.

Használatig hűtőszekrényben tárolja és tárolja. Használat előtt hagyja, hogy a lemez szobahőmérsékleten tartson.

Az előkészített közeg színe világos bézs.

alkalmazások

A legtöbb nem gyorsan növekvő kórokozó antibiotikum- vagy antibiotikumérzékenységi teszt elvégzésére használják.

Ha az agart vérrel egészítik ki, akkor az igényes mikroorganizmusok antibiotikumának, például: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus sp, Neisseria meningitidis, többek között. Azt is használták, hogy izolálja Legionella pneumophila.

Antibiogram technika

Az antibiotikum végrehajtása előtt 1,5 x 10-nek megfelelő baktériumoldatot kell készíteni⁸ sejt.

Ehhez 3-4 tiszta telepet veszünk a tiszta tenyészetből és szuszpendálunk egy tripticase szójalevélben vagy Müeller Hinton-táptalajban, 2–6 órán át inkubáljuk, és a koncentrációt steril fiziológiás sóoldattal állítjuk be, összehasonlítva a Mac Farland standardjával. 0,5%.

Ha igényesek mikroorganizmusok, a telepeket közvetlenül felfüggeszthetjük, amíg el nem érik a 0,5% -os Mac Farland koncentrációját. Ezt követően a Müeller Hinton lemezt az elkészített baktériumoldattal impregnált tamponnal vetik.

Ehhez merítse a tampont az oldatba, majd távolítsa el a felesleges folyadékot a cső falához nyomva. Közvetlenül azután, hogy a tampont a teljes felületen átengedik, nem érintkeznek érintetlen helyek, akkor enyhén forgassuk a lemezt és újra vetjük. A műveletet még 2 alkalommal ismételjük meg.

Hagyjuk állni 10 percig, majd helyezzük az antibiotikus korongokat steril csipesszel, és hagyjunk köztük 24 mm-t. Miután mindegyik lemezt az agarra helyezte, enyhén nyomja meg mindegyiket a szorítóval, hogy biztosítsa, hogy azok jól tapadjanak.

Az eljárás után a lemezt megfordítjuk és inkubáljuk 35-37 ° C-on aerobiosisban 16-18 órán át. Ha ez egy igényes mikroorganizmus, szükség lehet mikroaerofíliára, és ha az antibiotikum oxacillin lemezeket tartalmaz, akkor 24 órával kell olvasni..

Minden vonalzó átmérőjének mérésére egy vonalzó használható. Az eredményeket mm-ben kell rögzíteni. Ezt követően a kapott értékek korrelálnak az aktuális CLSI kézikönyvben közzétett vágási pontok tábláival.

Adjon érzékeny (S), köztes (I) vagy rezisztens (R) jelentést.

Az antibiotikumok kiválasztása az izolált mikroorganizmus és az előforduló fertőzés típusa szerint történik.

Néha az antibiotikumok stratégiai elhelyezését fenotípusos rezisztencia mintázatoknak kell tekinteni.

A lemezek stratégiai elhelyezése a Müeller Hinton agaron

Az enterobaktériumok esetében a klavulánsav-lemezt a 3. és 4. generációs cefalosporinok elé kell helyezni. A tojás alakú tágulás azt jelzi, hogy a törzs kiterjedt spektrumú béta-laktamázok (ESBL) termelője. Ez azt jelenti, hogy a beteg nem kezelhető cefalosporinnal.

Staphylococcusban fontos, hogy az eritromicin vagy azitromicin lemezt a klindamicin lemez előtt helyezzük el (D-teszt)..

Az eritromicinben rezisztens halo és a klindamicin-halo lapítása azt jelzi, hogy a törzs indukálható rezisztenciát mutat a klindamicin, törzs (RIC) ellen. Ez azt jelenti, hogy a klindamicin-kezelés nem lesz hatékony.

Az indukálható AMP C törzsek kereséséhez Enterobacteriaceae-ban és néhány nem fermentáló Gram-negatív bacillal a ceftazidim, a cefoxitin vagy a piperacillin tazobactan lemezei 27 mm-es távolságban találhatók..

Az imipenem felé néző lemezek egyikében lapított halo jelzi az indukálható AMP C jelenlétét.

A konstitutív AMP C kereséséhez a cloxacillin 500 μg-os lemezt ceftazidimmal (30 μg) és cefotaximmal (30 μg) kell szembenéznie 25 mm távolságban. A cefalosporinok egyikében a tágított halo pozitivitást jelez.

A cloxacillin lemezt egy 9 mm-es Whatman No. 6 szűrőpapírral is helyettesíthetjük, amelyet fenil-boronsavval (400 μg) impregnáltunk, 18 mm távolságban. Ez ugyanaz, mint az előző.

Végül a metallo-béta-laktamázok termelésének vizsgálata, különösen a Pseudomonas aeruginosa, egy 15 μl etilén-diamin-tetraecetsavval (EDTA 750 μg) és a tioglikolsavval (SMA 300 μg) impregnált lemezt imipenem és meropenem lemezek felé 15 mm távolságban használnak..

A teszt pozitív, ha az imipenem vagy a meropenem halosok az EDTA / SMA lemez felé terjednek. Ezt az eredményt a módosított Hodge tesztnek kell megerősítenie.

Ez a módszer a törzs törzsének beoltására szolgál Escherichia coli ATCC 25922 a Müeller Hinton lemezen. Egy imipenem-lemezt helyezünk a lemez közepére, majd egy fuvolát készítünk a lemezről a periféria felé a P. aeruginosa gyanús. Legfeljebb 4 törzset tesztelhet lemezenként.

A teszt pozitív lesz, ha az imipenem halo torzítási zónája van a stria körül.

A hibás eredmények okai

-A rosszul megőrzött antibiotikumok lemezei hamis ellenállást eredményezhetnek. Például az oxacillin lemez nagyon érzékeny a hőmérsékletváltozásokra.

-A jelzett (alsó) sav alatti közeg pH-ja kisebb halot eredményez az aminoglikozidokban és makrolidokban (hamis rezisztencia veszélye), és nagyobb halotok penicillinben, tetraciklinben és novobiocinban (hamis érzékenység kockázata).

-Ha a pH meghaladja a jelzett (lúgos) értéket, a fent leírt hatások megfordulnak.

-A magas timin- és timidin-koncentrációjú táptalajok jelentősen csökkentik a szulfonamidok és a trimetoprim gátlási halóseit.

-A kalcium és magnézium magas koncentrációi az aminoglikozidok, a polimixin B és a tetraciklinek hamis ellenállását eredményezik. Pseudomonas aeruginosa.

-A kalcium és a magnézium alacsony koncentrációi az aminoglikozidok, a polimixin B és a tetraciklinek hamis érzékenységét eredményezik. Pseudomonas aeruginosa.

-A cink jelenléte befolyásolja a karbapenemek lemezeinek (imipenem, meropenem és ertapenem) eredményeit..

-A 3 mm alatti közeg vastagsága hamis érzékenységet eredményez, míg az 5-nél nagyobb vastagság hamis ellenállást eredményez.

-A lemezek mobilizálása az antibiotikumban deformált halókat eredményez, mivel az antibiotikum kisülése azonnali.

- Nagyon gyenge inokulumok befolyásolják az eredményeket, mivel az agarban nem lesz egységes vagy konfluens növekedés, ami szükséges a gátlási zónák méréséhez, azon kívül, hogy a halók nagyobbak lehetnek, mint a normál.

-A túlterhelt inokulák a normálnál kisebb halot adhatnak.

-A lemezek közötti távolság figyelmen kívül hagyása egy halo átfedését eredményezi, és nem lehet helyesen olvasni.

-Inkubáljuk CO-val₂ növeli a tetraciklin- és a meticillin-lemezek halóseinek méretét.

-A 35 ° C alatti hőmérsékleten történő inkubálás nagyobb halot eredményez.

-A vér hozzáadása csökkenti a szulfonamidok halo-méretét.

korlátozás

Az antibiotikumban kimutatott antibiotikum mikroorganizmusokkal szembeni érzékenysége (in vitro) nem garantálja, hogy működni fog in vivo.

Minőségellenőrzés

Ha tudni akarjuk, hogy a közeg tartalmazza-e a megfelelő mennyiségű timint, meg kell vetni egy törzset az Enterococcus faecalis ATCC 29212 és tesztelje a trimetoprim-szulfametoxazolra (SXT) való érzékenységet, a halogénnek 20 mm-nél nagyobbnak kell lennie..

referenciák

1. - Agar Müller-Hinton. Wikipédia, A szabad enciklopédia. 2018. november 16., 12:23 UTC. 2019. január 27., 04:22
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.
3. Cona E. Az agar diffúziós vizsgálattal végzett jó érzékenységi vizsgálat feltételei. Rev Chil Infect, 2002; 19 (2): 77-81
4. Difco Francisco Soria Melguizo laboratórium. Müeller Hinton agar, 5% juh-vérrel. 2009. Elérhető: http://f-soria.es
5. BD Müeller Hinton II Agar laboratórium. 2017. Elérhető: .bd.com
6. Laboratóriumok Britania. Müeller Hinton agar. 2015-ben elérhető: britanialab.com
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.
8. Martínez-Rojas D. Betalactamasas AmpC típus: Általános és a fenotípusos kimutatás módszerei. Soc. Ven. Microbiol. 2009-ben; 29 (2): 78-83. Elérhető: scielo.org.
9. Perozo A, Castellano M, Ling E, Arraiz N. A metallobetalaktamák fenotípusos kimutatása klinikai izolátumokban Pseudomonas aeruginosa. Kasmera, 2012-ben; 40 (2): 113-121. Elérhető: scielo.org.