Papa dextróz alapozás, előkészítés és felhasználás

az papa dextróz agar szilárd, nem szelektív tápláló tápközeg. Bakteriális és gombás fajokat termelhet, de használatát főleg a fonalas gombák és élesztők izolálására használják. Az angol kifejezést a Potato Dextrose Agar PDA közegként is ismert.

Különösen hasznos a fitopatogén gombák, azaz a növényeket befolyásoló gombák izolálására. A minták fertőzött növényekből történő ültetéséhez más tápközegeket, például Sabouraud agart vagy málta-agart alkalmazhatunk, azonban rutinszerű alkalmazás esetén a nagyobb sporuláció miatt előnyös a burgonya-dextróz agar..

Azt is használják a gombás telepek számolására kozmetikai, gyógyszerészeti és néhány tejtermék-mintákban. Hasonlóképpen célszerű olyan bőrkaparó mintákat ültetni a dermatofitok keresésére, amelyek ebben a táptalajban nagyon jól fejlődnek, és jellegzetes pigmentjeiket alakítják ki.

A burgonya dextróz közeg nagyon egyszerű és könnyen előkészíthető a laboratóriumban. A neve szerint a burgonya-infúzió, a dextróz és az agar-agar tartalmaz. Ezenkívül gátló anyagokat is adhatunk a bakteriális növekedés megakadályozásához és a gombás fajok szelektivitásának növeléséhez.

index

• 1 Alapítvány
• 2 Előkészítés
  • 2.1 - Papa dextróz agar házi készítése (nem kereskedelmi célú)
  • 2.2 - Papa dextróz agar kereskedelmi előkészítése
• 3 Használat
  • 3.1. A növényi minták burgonya-dextróz agaron való ültetésére szolgáló eljárás
  • 3.2. Bőr-, haj- vagy körömmérlegek ültetésére szolgáló eljárás papa dextróz agaron
  • 3.3 Azonosítási eljárás
  • 3.4 Kolóniák száma
  • 3.5 A gombás törzsek fenntartása
• 4 Minőségellenőrzés
• 5 Referenciák

alapítvány

A papa dextróz agar olyan tápközeg, amely biztosítja a fonalas gombák és élesztők kifejlesztéséhez szükséges tápanyagokat.

A burgonya-infúzió glükózzal való kombinációja tökéletes energiaforrást biztosít a gombák kielégítő növekedéséhez. Míg az agar az, amely konzisztenciát biztosít a környezethez.

A tápközeg önmagában nem gátolja a baktériumok növekedését, így nem szelektív tápközeg. Szelektívvé tételéhez gátló anyagok, például borkősav vagy antibiotikumok hozzáadása szükséges.

előkészítés

-Házi készítésű (nem kereskedelmi) burgonya-dextróz agar készítmény

Petri-csészék

A következő módon készül:

Először is, a burgonyát nagyon jól mossuk, eltávolítva a szennyeződést. Vékony szeletekre vágjuk mindent és héjat. 200 g burgonyát lemérünk, és fél órán keresztül forraljuk egy liter desztillált vízben.

Az idő után szűrjük vagy feszesítjük a készítményt egy gézzel.

A kapott folyadékot desztillált vízzel egészítjük ki, amíg el nem éri az 1 liter értéket. Az infúzióhoz 20 g agar-agart és 20 g dextrózt adunk hozzá, jól keverjük és 121 ° C-on 15 perc nyomáson autoklávozzuk 15 percig.

Hagyjuk lehűlni 50 ° C-ra, és steril Petri-csészékben tálaljuk. Az elkészített lemezeket hűtőszekrényben tároljuk.

ékek

Készíthet papa dextróz agar ékeket is.

Ebben az esetben az autoklávban történő sterilizálás előtt a tápközeg 12–15 ml-ét csövekbe helyezzük, majd autoklávozzuk, és elhagyásuk után különleges támasztékokra helyezzük őket, amíg megszilárdulnak. Mentés hűtőszekrényben.

A tápközeg pH-értéke 5,6 ± 0,2, de néhány laboratórium 10% borkősavat ad a pH-érték 3,1 ± 0,1-re történő csökkentéséhez a baktériumok növekedésének gátlásához..

Ugyanebben az értelemben más laboratóriumok inkább antibiotikumokat adnak hozzá, hogy szelektívek legyenek a gombák termesztésére és megakadályozzák a baktériumok fejlődését..

-A burgonya-dextróz agar kereskedelmi előkészítése

Mérjünk be 39 g kereskedelmi forgalomban kapható dehidratált közeget, és oldjunk fel egy liter desztillált vízben. Hagyjuk pihenni 5 percig.

Az elegyet rendszeresen keverjük, amíg teljesen fel nem oldódik. Ezt követően autoklávban 121 ° C-on 15 percig sterilizáltuk.

Lemezek vagy ékek készíthetők. A fent leírtak szerint járjon el.

A pH értéke 5,6 ± 0,2. Ha a pH-érték 3,1, 14 ml 20% -os steril borkősavat kell adni a tálcákon való adagolás előtt..

A nem előkészített közeg színe bézs és előkészített világos borostyán, enyhén zavaros vagy opálos megjelenéssel.

alkalmazások

A növényi minták burgonya-dextróz agarban való ültetésére szolgáló eljárás

-A foltokkal rendelkező levelek

A leveleket darabokra vágják.

Az 50% -os 50% -os alkoholos üvegben helyezze a leveleit (festett és egészséges), hogy a felületet 20-30 másodpercig fertőtlenítse. Húzza meg az alkoholt, és adjon hozzá 20% -os nátrium-hipokloritot 40–50 másodpercig, ha vékony levelek, és növelje az időt 80 másodpercre, ha kéreg és naplók.

Húzza ki a nátrium-hipokloritot, és steril kapcsokkal vegye fel a fertőtlenített darabokat, és helyezze őket a közeg felületére (legfeljebb 10 darab). Helyezze a dátumot és inkubálja 20-30 ° C-on.

-Gyümölcsök és gumók

Ha a gyümölcs húsos, nyissa ki a gomba által érintett gyümölcsöket, és vegyen darabokat steril szikével, mind a beteg részével, mind az egészséges részével, és tegye azt az agar felületére..

Ha a gyümölcs citrusfélék, például citrom vagy narancs, akkor nyisd ki a magokat.

Amikor a gyümölcs felszínét érintik, és a spórákat megfigyelik, akkor a legjobb, ha a lemezre rácsosított módszert alkalmazunk; ez azt jelenti, hogy a spórákat "L" formában sterilizált és lehűtött spatulával megérintjük, majd 2–3-szoros zigzagot készítünk az agaron.

-A szemek esetében

Ezeket a levelekben leírtak szerint fertőtlenítjük, majd az agarra helyezzük.

-Az ágak és a szárak számára

A kéreg kaparása megtörténik, majd az egészséges és beteg részek darabjai kerülnek be, és közvetlenül az agarra vetik..

A vetett lemezeket aerobiosisban inkubáljuk 20-30 ° C-on 72 órán át.

Folyamat a bőr, haj vagy köröm mérlegek ültetésére papa dextróz agaron

A mintát egy szikével (11. sz.) Kell venni, vagy az érintett hajat, a bőrpehelyeket vagy a körmöket a dermatofitok kereséséhez. A mintavétel előtt a területet 70% -os alkohollal kell fertőtleníteni.

-Bőrminta

A pikkelyes elváltozásoknál a sérülés szélét meg kell kaparni, mivel nagyobb a valószínűsége, hogy megtalálják a gomba.

Exudatív elváltozások esetén a mintát száraz vagy nedves tamponnal veszik. Azonnal vetjük a burgonya dextróz agart vagy a Sabouraud agart. Kerülje a közlekedési eszközöket.

A mintavétel másik módja a Mariat és az Adan Campos szőnyegtechnikája. Ebben az esetben az érintett területet ötször dörzsöljük egy további steril gyapjúval a további műveléshez.

A mintát közvetlenül a tenyésztőközegbe helyezhetjük.

-Hajminta

A patológiától függően az érintett részt a gyökerek levághatják vagy elszakítják. A mintát a tenyésztőközegbe helyezzük.

-Körömminta

Meg lehet kaparni vagy vágni az érintett köröm egy bizonyos részét. Ez a sérülés típusától függ.

Vágás előtt a mintát 1 mm-es darabokra vágjuk, hogy növeljük a gomba érintkezésének valószínűségét a tenyésztőközeggel.

Azonosítási eljárás

A lemezben kapott telepeket burgonya-dextróz-agart tartalmazó csövekben izoláljuk a telepek makroszkópos vizsgálatára (megjelenés, szín, konzisztencia, fejlettségi fok)..

A mikroszkópos vizsgálat (a szerkezetek és azok képződményeinek megfigyelése) mikrokultúrákkal vagy közvetlen megfigyeléssel végezhető a mikroszkóp alatt a lamina és a lamella között..

Colony szám

Ez a közeg felhasználható a növényi mintákban, élelmiszerekben, kozmetikumokban vagy gyógyszerekben jelen lévő gombák és élesztők terhelésének meghatározására is. Ebből a célból antibiotikumokkal kiegészített papa-dextróz agart használunk, mint például: (kloramfenikol, klorotetraciklin vagy mindkettő).

Öntsünk 1 ml mintát - előnyösen hígítva - egy steril és üres petri-csészébe, majd olvassuk le a burgonya-dextróz agar dugót, és hagyjuk lehűlni 45 ° C-ra. Öntsük a petri-csészébe, és addig forgassuk, amíg homogenizálódik. Hagyja nyugodni, amíg megszilárdul.

Inkubáljuk aerobiosisban 20-25 ° C-on (penészgombák) vagy 30-32 ° C-on (élesztő) 5-7 napig vagy annál hosszabb ideig, a keresett gomba típusától és a minta típusától függően. Két lemez használható mindkét hőmérséklet-tartományban történő inkubáláshoz.

A gombás törzsek fenntartása

A papa dextróz agar több éven keresztül használható az életképes gombatörzsek fenntartására.

Ehhez a gombát papa dextróz agar ékekben termesztik, és a gomba termesztése után ásványi olajjal borítják. Az olajat autoklávban 45 percig sterilizálni kell, és hozzávetőleges viszkozitása 300-330 Saybolt. Az olajnak 1-2 cm-rel meg kell haladnia a ferde csúcsot.

Minőségellenőrzés

Minden elkészített tételből egy vagy két lemezt kell venni, és 25 ° C-on inkubálni 48 órán át, vagy 20 ° C-on 96 órán át. A jó sterilitás-szabályozás olyan, amelyben nincs kolóniák fejlődése.

Ismert vagy hitelesített kontroll törzsek, például:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Minden esetben jó növekedés várható.

referenciák

1. Laboratóriumok Britania. Papa glükózado agar. 2015-ben elérhető: britanialab.com
2. Neogen Laboratories Burgonya Dextrose agar. Elérhető: foodsafety.neogen.com
3. Insumolab laboratórium Burgonya dextróz agar. Elérhető: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.
5. Casas-Rincon G. Általános Mycology. 1994. 2nd Ed. Universidad Central de Venezuela, Könyvtár kiadás. Venezuela, Caracas.
6. Aceituno M. A szemhéjfesték mikrobiológiai minőségének értékelése, a nemzeti termelési laboratórium komplex por típusa, a Pharmacopeia Usp referenciamódszer szerint. San Carlos de Guatemala Egyetem.
7. Cuétara M. Felszíni minták feldolgozása. Iberoamerican Mycology Magazine. 2007-ben; pp. 1-12