Agar Sabouraud alapítvány, előkészítés és felhasználás

az Sabouraud agar, Sabouraud dextróz agar néven is ismert, szilárd táptalaj, különösen a gombák izolálásához és fejlődéséhez, például élesztők, penészgombák és dermatofitok számára..

Ezért a mikrobiológiai laboratóriumban ezt az eszközt nem lehet kimutatni a patogén vagy opportunista gombák jelenlétének vizsgálatára, akár klinikai, akár nem klinikai mintákból. Hasonlóképpen ideális a szálas baktériumok, például a Streptomyces és a Nocardia növekedésére is. Használata nagyon széles, emberi, állati, növényi és ipari mikológiában alkalmazható.

Ezt a médiumot 1896-ban a híres bőrgyógyász Raimond Sabouraud hozta létre, aki világszerte ismert fejbőr rendellenességek szakemberévé vált, főként dermatofiták okozta..

Létrehozása annyira fontos volt, hogy azóta használják, és ma is folytatódik, bár néhány módosítással.

Bár a gombákra különleges, ebben a közegben a baktériumok növekedhetnek, ezért a vegyes növényvilágú minták esetében antibiotikumokat kell bevonni az előállításukba, és ezáltal gátolni lehet a baktériumflóra növekedését..

Az antibiotikum megválasztását gondosan kell végezni, és figyelembe kell venni a helyreállítani kívánt gomba típusát, mivel egyes anyagok bizonyos anyagok jelenlétében gátolhatók..

index

• 1 Alapítvány
  • 1.1 A Sabouraud dextróz agar antibiotikumokkal leggyakrabban használt kombinációi
• 2 Előkészítés
  • 2.1 Dextrose Sabouraud agar 
  • 2.2 Sabouraud-dekstrozóz-agar (az Emmonok módosítása)
  • 2.3 Sabouraud-dextróz-agar (Emmons módosítása) kloramfenikollal
  • 2.4 Dextrose Sabouraud Emmons agar cikloheximiddel
  • 2.5 Dextróz-Sabouraud-agar (Emmons) kloramfenikollal és cikloheximiddel
  • 2.6 Egyéb antibiotikumok, amelyeket hozzá lehet adni
• 3 Különleges megfontolások
• 4 Minőségellenőrzés
• 5 Felhasználások
  • 5.1 Elsődleges művelés
  • 5.2 Sporuláció
  • 5.3 Megőrzés
  • 5.4 Mikrokultúrák
  • 5.5 Az emberi mikológiában
  • 5.6 Állati mikológia
  • 5.7 Környezeti mikológia
  • 5.8 Ipari mikológia
  • 5.9 Növényi mikológia
• 6 Referenciák

alapítvány

A Sabouraud-dextróz-agar olyan közeg, amely eredeti összetételében 5,6 ± 0,2 savas pH-ja miatt gyengén szelektív, azonban a baktériumok még mindig fejlődhetnek, főleg hosszabb ideig tartó inkubálás során.

A tápközeg kazein peptont és hasnyálmirigy-emésztett állati szövetet tartalmaz, amely a mikroorganizmusok fejlesztéséhez szén- és nitrogénforrást biztosít..

Magas koncentrációjú glükózt is tartalmaz, amely energiaforrásként működik, elősegítve a gombák növekedését a baktériumok felett. Mindegyik agar-agarral keverhető össze, amely a megfelelő konzisztenciát biztosítja.

Másrészt a Sabouraud-dextróz agar szelektív lehet, ha antibiotikumokat adnak hozzá.

Antibiotikumok esetén különösen hasznos sebmintákban, nyílt fekélyekben vagy bármely olyan mintában, amelyben nagy bakteriális szennyeződés gyanúja áll fenn..

A Sabouraud dextróz agar leggyakrabban használt kombinációi antibiotikumokkal

-Sabouraud agar kloramfenikollal: ideális élesztők és fonalas gombák kinyerésére.

-Sabouraud agar gentamicinnel és kloramfenikollal: ebben a táptalajban szinte minden szálas gomba és élesztő nő, és számos baktériumot gátol, beleértve az Enterobacteriumokat, a Pseudomonas-t és a Staphylococcus-t..

-Sabouraud agar cikloheximiddel: különösen hasznos a bőrből vagy a légutakból származó mintákban, amennyiben a gyanú dimorf gombák..

A cikloheximidet óvatosan kell alkalmazni; Annak ellenére, hogy gátolja a nem patogén vagy környezeti gombák és élesztők növekedését, amelyek a mintában szennyező anyagok lehetnek, ez gátolja bizonyos gombák, mint pl. Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp és más opportunista gombák.

-A Sabouraud-agar kloramfenikollal és cikloheximiddel: elsősorban dimorf dermatofiták és gombák izolálására használják. Hátránya, hogy bizonyos opportunista gombák fajtáit gátolja Candida nem albicans, Aspergillus, Zygomycetes vagy C. neoformans.

-Sabouraud agar kloramfenikollal, sztreptomicinnel, penicillinnel és cikloheximiddel: ideális baktériumokkal és szaprofitikus gombákkal szennyezett mintákhoz, de hátránya, hogy gátolja a szaporodást. Actinomyces és Nocardias, a fent említett opportunista gombák mellett.

előkészítés

Ha az összetevőket külön kapod, az alábbi módon készítheted el:

Dextróz agar Sabouraud 

sajnálom:

- 40 gr dextróz

- 10 g peptont

- 15 g agar-agar

- Mérjünk 1000 ml desztillált vizet

Az összes összetevőt összekeverjük, a pH-t 5,6-ra állítjuk be. Oldjuk fel az oldott anyagokat forrásban, 20 ml táptalajt adunk 25 x 150 mm-es csövekben, karima nélkül és pamut tetejével..

Más csőméretek is használhatók a rendelkezésre állás függvényében.

Autoklávozzuk 10 percig 121 ° C-on. Ne lépje túl az autoklávozási időt. Az autokláv elhagyásakor a csöveket egy tartószerkezettel megdöntöttük, amíg a fuvola csúcsán megszilárdulnak..

Egy másik módja az, hogy feloldjuk az összetevőket melegítéssel addig, amíg fel nem merül. Ugyanabban az autokláv fiolában 10 percig, majd 20 ml-t Petri-csészékbe osztjuk.

Ha rendelkezésre áll egy Sabouraud-dextróz-agar tápközeg, amely már tartalmazza az összes összetevőt, akkor a kereskedelmi ház által meghatározott mennyiséget egy liter vízre mérjük. A többi lépés megegyezik a fent leírtakkal.

Dextróz agar Sabouraud (Emmons módosítása)

sajnálom:

-  20 g dextróz

- 10 g peptont

-  17 g agar-agar

-  Mérjünk 1000 ml desztillált vizet

Az összes összetevőt összekeverjük, a pH-t 6,9-re állítjuk be. Folytassa ugyanúgy, mint az előző esetben.

Vannak olyan kereskedelmi házak, amelyek közeget biztosítanak az összes összetevővel. Ebben az esetben mérje meg és készítse elő a betétben leírtakat.

Sabouraud dextróz agar (Emmons módosítása) kloramfenikollal

Kloramfenikol törzsoldat

- Mérjünk be 500 mg kloramfenikol bázist

- Mérjünk 100 ml 95% -os etanolt

- kever

A Sabouraud-dextróz-agar táptalajt (Emmons) a fent leírtak szerint állítjuk elő, és minden egyes táptalaj literenként 10 ml kloramfenikol törzsoldatot adunk az autoklávozás előtt..

Dextróz agar Sabouraud Emmons cikloheximiddel

Cikloheximid törzsoldat

- Mérjünk be 5 g cikloheximidet

- Mérjünk 100 ml acetont

- kever

A Sabouraud dextróz agar táptalajt (Emmons) a fent leírtak szerint állítjuk elő, és minden egyes tápközeg literenként 10 ml cikloheximid törzsoldatot adunk az autoklávozás előtt..

Sabouraud-dextróz-agar (Emmons) kloramfenikollal és cikloheximiddel

A Sabouraud-dextróz-agar táptalajt (Emmons) a fent leírtak szerint állítjuk elő, és minden egyes tápközeg literenként 10 ml kloramfenikol törzsoldatot és 10 ml cikloheximid törzsoldatot adunk hozzá autoklávozás előtt..

Egyéb antibiotikumok, amelyek hozzáadhatók

20 000 - 60 000 egység penicillin / liter tápközeg.

30 mg sztreptomicin / liter tápközeg.

Mindkettőt be kell építeni a közeg autoklávozása után, enyhén lehűtött (50-55 ° C).

0,04 g neomicin / liter tápközeg.

0,04 g gentamicint / liter tápközeg.

Különleges megfontolások

A biztonság érdekében előnyben részesítjük a Sabouraud-dextróz-agart az ék alakú csövekben (fuvola csúcsában), nem pedig a Petri-csészékben, hogy elkerüljük a spórák diszpergálását és belégzését..

Fontos, hogy a Sabouraud agarral ellátott csöveket pamut ne csavaros kupakkal borítsák be, mivel bebizonyosodott, hogy a semianaerob körülmények bizonyos törzsekben gátolják a spórák kialakulását. Coccidioides immitis. Emellett a legtöbb gombák aerobik.

Csavaros kupak használata esetén ne zárja be szorosan.

Minőségellenőrzés

Az előkészített médiának minőségellenőrzéssel kell rendelkeznie ahhoz, hogy ellenőrizze a megfelelő működését. Ebből a célból bizonyos kontroll törzseket vetünk.

A Sabouraud dekstróz agar kloramfenikol ATCC törzsekkel használható. Candida albicans, amelyeknek nagyszerű növekedéssel kell rendelkeznie. Egy másik lemezt inokulálunk törzsekkel az Escherichia coli, teljesen le kell tiltani.

Inokulálatlan lemezt inkubálunk, amelyben semmilyen mikroorganizmusnak nem kell növekednie.

A kloramfenikollal és cikloheximiddel rendelkező Sabouraud-dextróz agart alkalmazhatjuk  Trichophyton mentagrophytes, jól kell fejlődnie. Egy másik lemezt oltunk egy törzskel Aspergillus flavus, ahol kevés a növekedés vagy nincs növekedés. Továbbá egy inokulálatlan lemezt inkubálunk annak sterilitásának bizonyítására.

Sabouraud dextróz agarhoz cikloheximiddel, a törzsek Candida albicans, Trichophyton rubrum  vagy Microsporum canis, amely jó növekedést mutat.

Hasonlóképpen, egy törzs Aspergillus flavus, alacsony növekedést vagy növekedést nem mutatnak. Végül inkubálunk egy inokulálatlan lemezt a sterilitás szabályozásához.

alkalmazások

Elsődleges termesztés

A Classic Sabouraud dextróz agar 4 gramm dextrózt tartalmaz, és kiváló, mint elsődleges leválasztó közeg, mivel az egyes gombák jellegzetes morfológiáját mutatja..

Kiválóan alkalmas a pigmentek előállításának bemutatására is. Ez azonban nem a legmegfelelőbb eszköz a sporuláció megfigyelésére.

Nem is ajánlott növekedni Blastomyces dermatitidis, amelyet a jelenlévő glükóz magas koncentrációja gátol.

Másrészt, bizonyos szempontokat szem előtt kell tartani a tenyésztés során.

Egyes gombák szobahőmérsékleten jobban fejlődnek, mint például a penészgombák, mások 37 ° C-on sikeresen fejlődnek, mint néhány élesztő, és mások mindkét hőmérsékleten fejlődhetnek (dimorf gombák).

Emiatt néha szükség van több Sabouraud-agarlemez használatára ugyanarra a mintára, mivel gyakran ültetnek két példányban, hogy egy lemezt szobahőmérsékleten és egy másik 37 ° C-os lemezre inkubáljanak..

Például, Sporothrix schenckii két lemezre vetik; az egyiket szobahőmérsékleten inkubáljuk, hogy megkapjuk a penészfázist, a másikot 37 ° C-on inkubáljuk az élesztő-szerű fázis eléréséhez, de az utóbbiban 5% vért kell hozzáadni a tápközeghez.

Más esetekben, mint a mycetomák mintáiban, két Sabouraud-agarlemezt vontunk be, egyet kloramfenikollal és a másik cikloheximidet. Az első lehetővé teszi a gombás eredetű miketomák (Eumicetoma) és a bakteriális eredetű mycetomák, például az aktinomycetomák okozta kórokozók növekedését..

sporulációja

Az Emmons által módosított, dextróz Sabouraud agar 2 gramm dextrózt tartalmaz, és nem csak izolálásra szolgál, hanem a gombák sporulációjára és megőrzésére is..

Ebben a közegben, ha helyreállíthatja a törzseket Blastomyces dermatitidis.

megőrzés

A gombakultúrák megőrzése hűtőszekrényben (2-8 ° C) tárolható. A tárolási idő 2-8 hét lehet. Ezután a műveletet meg kell ismételni.

Néhány gombát legjobban szobahőmérsékleten, például Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum és Microsporum audounii.

A törzs fenntartása a pleomorfizmus elkerülése érdekében meghosszabbítható, ha a dextrózt teljesen eltávolítjuk az agarról, és ha a közegben az agar mennyisége csökken, a szárazság elkerülése érdekében.

mikrotenyészetek

Néhány fonalas gombák azonosításához szükséges a mikrokultúrák Sabouraud agar vagy más speciális eszköz alkalmazása a szexuális és asszexuális reprodukció megfigyelésére..

Az emberi mikológiában

Főként a gombás betegségek diagnosztizálására használják, különösen azokat, amelyek befolyásolják a bőrt és a kötőanyagokat (haj és körmök)..

A minták lehetnek kiválasztások, exudátumok, bőr, haj, körmök, köpet, CSF vagy vizelet. Az általánosan izolált kórokozók a dermatofiták, a szubkután és szisztémás gombás fertőzést okozó gombák.

Állati mikológia

Az állatokat gyakran gombafertőzések befolyásolják, így a Sabouraud agar ugyanolyan hasznos az állatokban, mint az emberi mikológiában..

Például a dermatofiták gyakran befolyásolhatják az állatokat. Ilyen a helyzet A Microsporum canis var distortum, amelyek gyakran fertőzik a kutyákat, macskákat, lovakat, sertéseket és majmokat. is, Microsporum gypseum fertőzi a kutyákat, macskákat és szarvasmarhákat.

Az olyan madarak, mint a csirkék, kakasok és csirkék érintettek Microsporum gallinae.

Más gombák, mint például Zymonema farciminosum, az állatokban, főként lovakban, öszvérekben és szamarakban is előfordulnak betegségek okai, amelyek a nyirokerekben fontos gyulladást okoznak..

Sporothrix schenkii és Histoplasma capsulatum befolyásolják a házi és emberi állatokat.

Környezeti mikológia

Számos patogén vagy opportunista gombát adott időpontban lehet koncentrálni egy adott környezetben, különösen a klinikák és kórházak operációs helyiségeiben és intenzív osztályaiban. Ezért szükséges, hogy ellenőrizzék őket.

Más sérülékeny terek a könyvtárak és a régi épületek, amelyekre a környezeti gombák koncentrációja befolyásolhatja.

Környezeti vizsgálatokban a Sabouraud dextróz agart használják a gombák izolálására.

Ipari mikológia

A kozmetikumok, élelmiszerek, italok, bőr, textíliák gyártásában a gombás szennyeződések tanulmányozásában a Sabouraud dextróz agar nem hiányozhat..

Növényi mikológia

A növények szintén gomba okozta betegségeket szenvednek, amelyek a növény különböző részeit érintik, ami akár a betakarítás befejezéséhez is vezethet, ami nagy veszteségeket okoz a mezőgazdaságban..

referenciák

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Mikózisok mikrobiológiai diagnózisa és érzékenységvizsgálatok gombaellenes szerekre. A spanyol fertőző betegségek és klinikai mikrobiológia társaság ajánlásai. Elérhető: coesant-seimc.org
2. ValteK Laboratórium. (2009). Sabouraud dextróz agar cikloheximiddel. Elérhető: andinamedica.com.
3. Navarro O. (2013). Állatorvosi mikológia. Nemzeti Agrártudományi Egyetem. Nicaragua.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Argentínában. Panamericana S.A szerkesztő
5. Casas-Rincon G. Általános Mycology. 1994. 2nd Ed. Universidad Central de Venezuela, Könyvtár kiadás. Venezuela, Caracas.