Agar véralapozás, felhasználás és előkészítés

az vér agar ez egy gazdag szilárd anyag, differenciál, de nem szelektív. A klinikai mintákból vagy szubkultúrákból származó sokféle mikroorganizmus helyreállítására és növekedésére szolgál.

A legtöbb laboratóriumban kapott klinikai minta vetéséhez klasszikus vér agart kell alkalmazni; kivéve a székletmintákat, ha nem hasznos, kivéve, ha bizonyos módosításokkal készült.

Ez a tenyésztőközeg alapvetően egy dúsított bázis agarból és 5% vérből áll. Az agar alapja az igényektől függően változhat, de főleg peptonokból, aminosavakból, vitaminokból, húskivonatból, nátrium-kloridból, agarból áll..

Ami a vért illeti, általában szükséges, hogy kapcsolatba lépjen egy bioteriummal, hogy az állatokból, például juhokból, nyúlból vagy lóból vér jöjjön létre. Ez azonban nem mindig lehetséges, és néha emberi vér kerül felhasználásra.

A vér-agar táptalajt a laboratóriumban elő lehet állítani, vagy készen áll arra, hogy az erre szánt vállalatok számára kész legyen. A közeg előkészítése az egyik legkényesebb, minden előkészítéssel kapcsolatos gondatlanság szennyezett tételt eredményez.

Éppen ezért minden lehetséges óvintézkedést meg kell tenni, és végül a minőségellenőrzést 37 ° C-on 1 lemezen kell inkubálni minden 100 készüléken..

index

• 1 Alapítvány
• 2 Használat
  • 2.1 A vércsoport kiválasztása
  • 2.2 Az alap agar típusának megválasztása
  • 2.3 A vér agar felhasználása az előállításához használt alapközeg szerint
• 3 Előkészítés
  • 3.1 Mérjük meg és oldjuk fel
  • 3.2 Sterilizálás
  • 3.3 A vér összegyűjtése
  • 3.4 Öntsük bele a Petri-csészébe
• 4 Referenciák

alapítvány

Már említettük, hogy a vér agar jellemzője, hogy gazdagított, differenciált és nem szelektív táptalaj. Az egyes tulajdonságok alapjait az alábbiakban ismertetjük.

A vér agar egy dúsított tápközeg, mivel fő adalékanyagként 5-10% vért tartalmaz agar bázison. Mindkét vegyület sok tápanyagot tartalmaz, és ez a tulajdonság lehetővé teszi a termesztett baktériumok nagy részének növekedését.

Ez a növekedés korlátozás nélkül történik; ezért nem szelektív. Ha azonban a közeghez olyan vegyületeket adunk, amelyek megakadályozzák egyes mikroorganizmusok növekedését és elősegítik mások növekedését, akkor szelektív lesz. Ez az eset áll fenn, ha bizonyos típusú antibiotikumokat vagy gombaellenes szereket adnak hozzá.

Hasonlóképpen, a vér agar differenciált tápközeg, mivel lehetővé teszi a 3 típusú baktérium megkülönböztetését: béta-hemolitikus, alfa-hemolitikus és gamma-hemolitikus..

A béta-hemolitikusok azok, amelyek képesek a vörösvértestek lizálódására vagy teljesen lebontására, tiszta települést képezve a kolóniák körül, így ß vagy β hemolízist eredményeznek - a hemolízist és a mikroorganizmusokat ß-hemolitikusnak nevezik.

A p-hemolitikus baktériumok példái Streptococcus pyogenes és Streptococcus agalactiae.

Az alfa-hemolitikusok azok, amelyek részleges hemolízist hajtanak végre, ahol a hemoglobin metemoglobinná oxidálódik, és zöldes színezést generál a telepek körül. Ezt a jelenséget hemolízis α vagy α-hemolízisnek nevezik, és a baktériumok α-hemolitikusnak minősülnek..

Az a-hemolitikus baktériumok példája Streptococcus pneumoniae és Streptococcus a csoport viridans.

Végül a baktériumok gamma-hemolitikus vagy nem hemolitikusak. Ezek az agaron anélkül nőnek, hogy változásokat hoznának létre, ami a γ-hemolízis néven ismert, és a mikroorganizmusok γ-hemolitikusak..

Példa γ-hemolitikus baktériumokra: a D csoportba tartozó Streptococcus egyes törzsei (Streptococcus bovis és Enterococcus faecalis).

alkalmazások

A vér agar táptalaj a mikrobiológiai laboratóriumban leggyakrabban használt tápközeg.

A vér agar táptalajon növekvő mikroorganizmusok közé tartoznak a következők: szigorú, fakultatív, mikroaerofil, anaerob, Gram-pozitív vagy Gram-negatív aerob baktériumok, gyorsan növekvő vagy lassan növekvő baktériumok.

Növekszik a táplálkozási szempontból is igényes vagy zavaró baktériumok, valamint a gombák és az élesztők is. Hasonlóképpen hasznos szubkultúrázni vagy újra aktiválni a nagyon gyenge metabolikus törzseket.

Azonban a vércsoport és az alap agar megválasztása a várható mikroorganizmustól függően változik, és a plakk (kultúra vagy antibiotikum) alkalmazása..

Vércsoport kiválasztása

A vér bárány, nyúl, ló vagy ember lehet.

A legelőnyösebb a bárányvér, néhány kivételtől eltekintve. Például a Haemophilus fajok izolálásához, ahol az ajánlott vér ló vagy nyúl, mivel a bárány vérében olyan enzimek vannak, amelyek gátolják az V. faktort.

A legkevésbé ajánlott az ember, de a leggyakrabban használt, talán azért, mert a legegyszerűbb a beszerzése. 

A vért defibrinálni kell, bármilyen adalékanyag és egészséges állat nélkül. Az emberi vér használatához számos tényezőt kell szem előtt tartani:

Ha a vér olyan személyektől származik, aki bakteriális fertőzést szenvedett, specifikus antitestekkel rendelkeznek. Ilyen körülmények között valószínű, hogy bizonyos baktériumok növekedését gátolja.

Ha ez a vérbankból származik, citrátot tartalmaz, és lehetséges, hogy bizonyos baktériumok jelenlétében nem fejlődnek ki. Másrészt, ha a vér olyan betegektől származik, akik antibiotikumot szednek, a fogékony baktériumok növekedése gátolható..

És ha a vér egy cukorbeteg személyből származik, a felesleges glükóz zavarja a hemolízis minták megfelelő fejlődését.

A bázis agar típusának megválasztása

A vér agar előállításához használt bázis agar nagyon széles lehet. Ezek közé tartoznak a következők: tápanyag agar, agyi szív infúziós agar, triptáz-szója agar, Müeller Hinton agar, Thayer Martin agar, Columbia agar, Brucella agar, Campylobacter agar stb..

A vér agar felhasználása az előállításához használt bázisközeg szerint

Tápanyag-agar

Ez a bázis a legkevésbé használt, mert rajta főleg nem igényes baktériumokat, például bélben oldódó bacillákat termeszt, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, többek között. A Streptococcus izolálása nem ajánlott.

Szív-agyi infúziós agar (BHI)

Az egyik legelterjedtebb a vér-agar alapja, mivel a baktériumok növekedéséhez szükséges tápanyagokkal rendelkezik. Streptococcus sp és egyéb igényes baktériumok. Bár nem célszerű a hemolízis mintáit megfigyelni.

Ezzel a bázissal általában bárányvért használnak.

A vér agar variánsok is előállíthatók, ahol más vegyületeket is adunk bizonyos mikroorganizmusok izolálásához. Például az agyi szív infúziós agar, amelyet nyúlvérrel, cisztinnel és glükózzal kiegészítettünk, az izolálásra szolgál Francisella tularensis.

Míg a cisztin-tellurittal hasznos az izolálás Corynebacterium diphteriae. Használhat emberi vagy bárányvért.

Az elsővel a béta-hemolízis szűk halo lesz, míg a második a halo sokkal szélesebb lesz.

Hasonlóképpen, ezt a bázist a bacitracinnal, a kukoricakeményítővel, a lóvérrel és más gazdagító kiegészítőkkel (IsoVitaleX) együtt használják a nemzetség izolálására. Haemophilus sp légzési mintákból.

Továbbá, ha az antibiotikumok kloramfenikol - gentamicin vagy penicillin - sztreptomicin kombinációját a lóvérrel adjuk hozzá, akkor ideális az igényes patogén gombák izolálásához, még akkor is, ha a Sabouraud glükóz agarnál nagyobb hozam érhető el. Különösen hasznos az elszigeteltségben Histoplasma capsulatum.

Tryptív szójabab

Ez a bázis a leginkább ajánlott a hemolízis mintázatának és a diagnosztikai tesztek, mint például az optoquin és a bacitracin taxonainak jobb megfigyelése érdekében. Ez a klasszikus vér agar, amelyet rutinszerűen használnak.

Ezzel a bázissal elkészítheti a speciális vér agart is Corynebacterium diphteriae, tellurium cisztinnal és bárányvér.

Hasonlóképpen, az agar kombinációja bárányvérrel és kanamicin-vankomicinnel ideális az anaerobok, különösen Bacteroides sp.

Agar Müeller Hinton

Ezt a vérrel kiegészített bázist az igényes mikroorganizmusok antibiotikumának, pl Streptococcus sp.

Alkalmas baktériumok izolálására is Legionella pneumophila.

Agar Thayer Martin

Ez a táptalaj ideális a vér agar alapjaként, ha a Neisseria nemzetséget feltételezik, különösen Neisseria meningitidis, mint N. gonorrhoeae nem nő a vér agaron.

Emellett a fogékonysági vizsgálatok elvégzésére is szolgál Neisseria meningitidis.

Agar Columbia

Ez a bázis kiválóan alkalmas gyomorbiopsziák mintáinak vetésére Helicobacter pylori.

A tápközeget úgy állítjuk elő, hogy az antibiotikumokkal (vankomicin, trimetoprim, amfotericin B és cefsulodin) defibrinált 7% bárányvért hozzáadjuk más típusú baktériumok növekedésének korlátozásához..

Ugyanez a bázis, amelyet humán vagy bárányvérrel, nalidix savval és kolisztinnal kiegészítettek, hasznos az izoláláshoz Gardnerella vaginalis. Ideális az ugyanazon mikroorganizmus antibiotikumokkal szembeni antimikrobiális érzékenységének értékelésére is.

Ezenkívül véragar előállítására használják anaerobok tenyésztéséhez, aminoglikozidok és vankomicin hozzáadásával..

Ez a bázis lehetővé teszi számunkra, hogy megfelelően megfigyeljük a hemolízis mintáit.

Brucella Agar

Ez a táptalaj, amelyet a vér-agar alapjaként K-vitamin hozzáadásával együtt alkalmaznak, ideális anaerob baktériumok termesztéséhez. Ebben az esetben ajánlott a bárányvér használata.

Campylobacter agar

Az 5% juh- és 5 antibiotikummal kiegészített Campylobacter Agar (cefalotin, amfotericin B, trimetoprim, B-polimixin és vankomicin) az a közeg, amelyet izolálunk. Campylobacter jejuni székletmintákban.

előkészítés

Minden kereskedelmi ház a csomagolás hátsó részébe hozza az utasításokat egy liter táptalaj elkészítéséhez. A megfelelő számításokat úgy állíthatjuk elő, hogy a kívánt mennyiséget a kiválasztott bázis agar szerint állítsuk elő.

Mérjük meg és oldjuk fel

Az alap agar dehidratált (por), így desztillált vízben kell feloldani, pH-ját 7,3-ra állítva.

A kiválasztott bázis agar által jelzett mennyiséget megmérjük és feloldjuk a megfelelő mennyiségű vízben egy fiolában, majd mérsékelt hőre melegítjük és forgó mozgásokkal keverjük, amíg az összes por fel nem oldódik..

sterilizálás

Feloldás után sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 20 percig.

A vér összegyűjtése

Az autokláv elhagyásakor hagyja, hogy a fiola lehűljön, amíg a hőmérséklet 40 és 50 ° C között ingadozik; olyan hőmérséklet, amelyet az emberi bőr hordoz, és ugyanakkor az agar még nem megszilárdult.

Ehhez a fiolát megérinti a keze, és ha a hő elviselhető, az ideális hőmérséklet a megfelelő mennyiségű defibrinált vér hozzáadásához (50 ml / liter agar). A homogenizáláshoz finoman keverjük össze.

A vér aggregátumának áthaladása döntő fontosságú, mert ha a közeg nagyon forró, akkor a vörösvérsejtek megszakadnak, és a közeg nem fogja a hemolízist megfigyelni..

Ha túl hideg hozzáadódik, a csomók képződnek, és a közeg felülete nem lesz sima, hogy a fuvola megfelelően legyen.

Öntsük Petri-csészékbe

A vér homogenizálása után azonnal steril petri-csészében tálaljuk. Minden Petri-csészébe körülbelül 20 ml-t öntünk. Ezt az eljárást lamináris áramlású motorháztetőben vagy az öngyújtó közelében végezzük.

Ha a Petri-csészékben a vér-agart szolgálják, a lemez felületén nem maradhat légbuborék. Ha ez megtörténik, a Bunsen égő lángja gyorsan áthalad a lemezen, hogy megszüntesse őket..

A lemezeket hagyjuk megszilárdulni és hűtőszekrényben (2-8 ° C) tárolni, amíg fel nem használják. A vér használata előtt az agarlemezeket le kell temperálni (hagyjuk szobahőmérsékleten tartani).

Az elkészített lemezek körülbelül 1 hétig tartanak.

referenciák

1. Bayona M. Mikrobiológiai feltételek a tenyésztéshez Helicobacter pylori. Rev Gastroenterol 2013 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Gyakorlati klinikai mikrobiológia. Cadizi Egyetem, 2. kiadás. UCA Kiadványok Szolgáltatása.
3. "Agar vér." Wikipédia, A szabad enciklopédia. 2018. december 10., 14:55 UTC. 2018. december 27., 01: 49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Argentínában. Panamericana S.A szerkesztő.
5. CEDIVET Laboratory Veterinary Diagnostic Center. Guatemalában. Elérhető: trensa.com.
6.  Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. (5. kiadás). Argentína, szerkesztő Panamericana S.A..