Agar TCBS alapozás, előkészítés és használat



az TCBS agar egy nagyon szelektív és differenciált szilárd táptalaj, amelyet a Vibrio baktériumok izolálására és tenyésztésére használnak, különösen Vibrio cholerae, V. vulnificus és V. parahaemolyticus mint e nemzetség fő kórokozói.

A TCBS rövidítés a tioszulfát-citrát-szacharóz. Ez az agar a Vibrios szelektív táptalajaként is ismert. Az eredeti képletet Nakanishi készítette, majd Kobayashi módosította.

Élesztőkivonatból, hús peptonból, tripteinből, nátrium-citrátból, nátrium-tioszulfátból, ökör epeből, szacharózból, nátrium-kloridból, vas-citrátból, brómtimol-kékből, timol-kékből és agarból áll..

Ez a készítmény lehetővé teszi a Vibrio fajok megfelelő fejlődését a vízből, székletből és élelmiszermintákból; kivéve Vibrio hollisae, amely nem nő ebben a közegben. Ezenkívül a TCBS tápközeg képes gátolni más kísérő baktériumok, különösen a koliformák növekedését.

A Vibrio nemzetség egyes fajtáinak súlyos gyomor-bélrendszeri és bélrendszeri problémái miatt a diagnózisa nagyon fontos. Az embert főként a nyers vagy alultáplált tengeri élelmiszerek vagy a szennyezett víz fogyasztása okozta, de a sebek.

Emiatt a klinikai laboratóriumoknak ki kell terjedniük a TCBS agarra a folyadék székletminták székletkultúráinak tanulmányozásában, különösen a rizs víz megjelenésével. Különösen akkor, ha a beteg a tengervízzel érintkezett, vagy tenger gyümölcseit vagy halakat fogyasztott.

index

  • 1 Alapítvány
  • 2 Előkészítés
  • 3 Használja
  • 4 Tömörített
  • 5 Korlátozás
  • 6 Minőségellenőrzés
  • 7 Referenciák

alapítvány

Az élesztőkivonat, a hús peptonok és a triptein a tápanyag forrása. Ugyanakkor a TCBS agar a legtöbb baktérium számára nem kívánatos közeg.

Nagy szelektivitását nátrium-citrát és ökör epe hozzáadásával adjuk meg; mindkettő gátló szer, amely szintén alkalikus pH-t biztosít a tápközeghez, korlátozva a kísérő növényzet növekedését, és elősegíti a növekedést. V. cholerae, más fajok körében. Ezt meg kell jegyezni Vibrio cholerae nagyon érzékeny a gyomorégésre.

A nátrium-klorid az ozmotikusan egyensúlyoz a közeggel. Ezen túlmenően, mivel koncentrációja magas, gátló szerként is működik, elősegítve a halofil baktériumok növekedését.

A szacharóz a fermentálható cukor, amely a brómtimol és a timol kék kék indikátorával együtt megkülönbözteti a közeget. Emiatt ezáltal lehetséges a szacharóz fermentációs törzsek megkülönböztetése a nem fermentáló törzsektől.

A szacharóz-fermentáló törzsek kolóniái sárga színűekké válnak, és a savak előállítása miatt zöldről sárgare váltják a táptalajt. A nem-fermentorok áttetszőek és a közeg az eredeti szín (zöld) marad.

Hasonlóképpen, ez a tápközeg nátrium-tioszulfátot tartalmaz kén és vas-citrát forrásként, mint kinyitószert. Mindkettő mutatja a hidrogén-szulfid előállítására képes baktériumokat (színtelen gáz). A H2S képződik a tioszulfátból, majd később vas-citráttal reagáltatva látható fekete csapadék képződik.

Végül az agar a szilárd anyag konzisztenciáját adja a közegnek.

előkészítés

Mérjünk be 89 g dehidratált táptalajt és oldjunk fel egy liter desztillált vízben. Segíts feloldódást a fűtés és a gyakori keverés során. A keveréket 2 percig forraljuk.

Ez a közeg nem autokláv. Az oldódás után közvetlenül steril lemezekre szolgálják. Szilárdításkor a foltok készítői fordított irányban vannak elrendezve, és hűtőszekrényben (2-8 ° C) tárolják, amíg fel nem használják.

Az előkészítés után a tápközeg pH-ja 8,6 ± 0,2 legyen.

A dehidratált közeg színe világos bézs vagy zöldes-bézs, és a közeg színe erdei zöld vagy kékes zöld.

Fontos, hogy a minták vetését megelőzően a lemezeket temperálják.

használat

A vibriók izolálására a leggyakoribb minta a hasmenés.

A székletmintákat, ha nem lehet közvetlenül a szelektív táptalajon elvenni, Cary Blair közepén kell szállítani.

A tenyésztés érzékenységének növelése érdekében a széklet a 8,4 pH-értéken 8,4 pH-értékű peptonvízen keresztül 8 óra hosszat vezethető át, onnan a TCBS táptalajra szubkultúrázva..

Emlékeztetni kell arra is, hogy a Vibrios egyes törzsei immunszuppresszált betegeknél szeptikémiát okozhatnak, így a vérkultúrákból izolálhatók. Hasonlóképpen, a vízből és a tengerből származó élelmiszerekből származó mintákat lehet elemezni, ha a kolera-betegség járványos.

beültetett

A vizsgált minta inokulumának kiemelkedőnek kell lennie, a vetés a kimerüléssel történő sztringelés módszerével történik. A lemezeket 37 ° C-on inkubáljuk 24 órán át aerobiosisban.

A. \ T Vibrio cholerae Közepes méretűek, sima, átlátszatlanok, vékony élekkel és sárgaek, mert szacharózt termelnek..

Hasonló módon, a fajok V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii és néhány V. vulnificus. Más Vibrios fajok klinikailag fontosak V. parahaemolyticus ne erjedjen szacharózt, amely olíva zöld telepekként fejlődik.

Másrészt szem előtt kell tartanunk, hogy az Aeromonas és a Plesiomonas egyes törzsei, amelyek oxidáz (+), ebben a táptalajban nőhetnek, sárga kolóniákat fejlesztve, amelyek összekeverhetik a klinikát. Míg a Pseudomonas néhány törzse is oxidáz (+) növekszik, mint zöld telepek, valamint V. parahaemolyticus.

korlátozás

A Vibrio nemhez tartozó oxidáz tesztet soha nem szabad a TCBS agarból nyert telepekből elvégezni, mivel a kapott eredmény hamis negatív. A közegben lévő vegyületek erősen befolyásolják a vizsgálatot. Ezért a szubkultúrákból vér-agaron kell elvégezni.

Minőségellenőrzés

Annak igazolására, hogy a közeg jó állapotban van, ajánlatos ismert vagy hitelesített törzseket ültetni és megfigyelni, hogy a növekedés megfelel-e a várható tulajdonságoknak.

Ehhez:

-Vibrio cholerae - Megfelelő növekedés (sárga telepek, áttetsző határ).

-Vibrio parahaemolyticus - Megfelelő növekedés (zöld középpontú és áttetsző határú kolónia).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - kielégítő növekedés (sárga telepek, amelyek a kolónia körül azonos színűek).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - teljes vagy részleges gátlás (kis sárga vagy áttetsző telepek).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 - részleges vagy teljes gátlás (kék telepek).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Teljesen gátolt.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Teljes vagy részleges gátlás. (Kis telepek középpontjában zöld áttetsző él).

Egy beoltatlan közeg inkubálása nem változhat.

referenciák

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS agar. 2009. Elérhető: f-soria.es
  2. BD laboratórium. BD. TCBS Agar 2003. Elérhető: bd.com
  3. Laboratóriumok Britania. TCBS közepes. 2015-ben elérhető: britanialab.com
  4. Acumedia Laboratories TCBS agar. 2016. Elérhető: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.