Agar Thayer Martin alapítvány, előkészítés és felhasználás

az Thayer Martin agar Ez egy rendkívül tápláló és szelektív szilárd táptalaj Neisseria meningitidis és Neisseria gonorrhoeae; mindkettő patogén vagy klinikailag fontos Neisseria néven ismert.

A Thayer Martin agar egyik legfontosabb sajátossága a táplálék-kiegészítők magas tartalma. Ez a tulajdonság elengedhetetlen, mert a Neisserias nagyon igényes mikroorganizmusok a táplálkozási szempontból, és ezért nem nőnek a közös médiában.

Másrészt, mivel ezek a mikroorganizmusok általában nem steril területeken találhatók, a kísérő növényzet növekedését gátló inhibitorok hozzáadása szükséges a Neisseria nemzetség fejlődésének befolyásolása nélkül..

Ez az agar GC-bázis agarból, hemoglobinból, kiegészítő táplálék-kiegészítőkből és gátló anyagok (antibiotikumok és gombaellenes szerek) komplexéből áll. A kereskedelmi házak az egyes kiegészítőket külön értékesítik.

Az e közegbe ültetendő minta a keresett mikroorganizmustól függ. hogy Neisseria gonorrhoeae Az ideális minták vaginális és húgycső kiválasztások. Míg Neisseria meningitidis a leggyakrabban használt minták a CSF, a pharyngealis és a nasopharyngealis váladékok.

index

• 1 Alapítvány
  • 1,1 GC bázis agar
  • 1.2 Hemoglobin
  • 1.3. Dúsítási kiegészítés
  • 1.4 Inhibitorok
• 2 Előkészítés
  • 2.1 Eredeti Thayer Martin Agar
  • 2.2 Agar Thayer Martin módosítva
• 3 Használja
• 4 Minőségellenőrzés
• 5 Korlátozások
• 6 Referenciák

alapítvány

A Neisseriasok mikroorganizmusok, amelyek zavarónak minősülnek, ezért elszigeteltségük nehéz. Emiatt a Thayer Martín összetett közeg, és minden összetevője az alábbiakban ismertetett funkciót teljesíti:

GC mag agar

A GC agar proteóz peptont, kukoricakeményítőt, nátrium-kloridot, dikálium-foszfátot, monokálium-foszfátot és agar-agart tartalmaz. Alkotórészei biztosítják a mikrobiális fejlődéshez szükséges alapvető tápanyagokat, semlegesítik a mérgező zsírsavat, hozzájárulnak az ozmotikus egyensúly fenntartásához, a pH meghatározásához és szilárd környezet biztosításához a környezethez.

hemoglobin

A hemoglobin V és X faktorokat (nikotinamid-adenin-dinukleotid NAD és hemin) biztosít. Ezért ebben a környezetben a Haemophilus fajok is nőnek. A hemoglobin kereskedelmi forgalomban dehidratált formában vagy friss defibrinált szarvasmarha-vérrel adható a közeghez..

Bővítő kiegészítés

Másrészről a Thayer-Martin közeghez hozzá kell adni egy dúsító kiegészítést, mivel az alap agarban lévő tápanyagok nem elegendőek a Neisseria nemzetség követelményeihez..

A leggyakrabban használt dúsítási kiegészítést izovitalexnek nevezik. Glutamint, adenint, NAD-t, kokarboxilázt, guanint, vas-nitrátot, p-amino-benzoesavat, B12-vitamint, tiamint és glükózt tartalmaz. Mindezek a vegyületek szükségesek a patogén Neisseria megfelelő fejlődéséhez.

inhibitorok

Mivel nagyon tápláló tápközeg, az inhibitorokat a terület szokásos növényvilágának mikroorganizmusainak növekedésének megakadályozására kell felhasználni, és ezáltal előnyös a Neisseria nemzetség izolálása..

Az inhibitor komplex vankomicint, kolisztint és nisztatint tartalmaz. A vankomicin gátolja a Gram-pozitív baktériumok növekedését, a kolisztin megakadályozza a Gram-negatív baktériumok, például a Pseudomonas és néhány szaprofitikus Neisseria kialakulását, és a nystatin élesztőkre hat Candida albicans.

Ezután Thayer Martin agart módosítottuk; a változások a trimetoprim hozzáadása, az agar mennyiségének növekedése és extra glükóz hozzáadása. Ezek a változások jelentősen javították a fajok helyreállítását Neisseria gonorrhoeae.

Meg kell jegyezni, hogy a trimetoprim gátolja a Proteus nemzetség növekedését és annak következményeit. Ebben az értelemben az antibiotikumok a Thayer Martin közepes szelektivitását biztosítják.

előkészítés

Eredeti Thayer Martin Agar

-GC agar

Mérjünk 8,2 g dehidratált GC táptalajt és 100 ml-ben szuszpendáljuk. Keverjük össze és forraljuk 1 percig, gyakori keverés mellett, hogy teljesen feloldódjon. Sterilizáljuk az elegyet autoklávban 121 ° C-on 15 percig.

-2% hemoglobin

2 g dehidratált hemoglobint 2 vagy 3 ml forró desztillált vízben szuszpendálva egységes keveréket képez. Adjunk hozzá kicsit több vizet a 100 ml térfogat eléréséhez. A szuszpenziónak sterilizálás előtt homogénnek kell lennie.

Sterilizáljuk autoklávban 15 percig.

-Bővítő kiegészítés

A kereskedelmi utat a kereskedelmi forgalomban lévő hígítóval kell feloldani. Keverjük össze jól. A felhasználásra kerülő hígítószer mennyiségét a készlet utasításai tartalmazzák..

-V.C.N gátlási kiegészítés (vankomicin, kolisztin, nisztatin)

Oldja fel az injekciós üveget a kereskedelmi ház által biztosított hígítószerrel. Keverjük össze jól. A felhasználásra kerülő hígítószer mennyiségét a készlet utasításai tartalmazzák..

-előkészített

Minden 100 ml GC agarra a következőképpen járunk el:

Amikor a GC-agar elhagyja az autoklávot, hagyjuk lehűlni körülbelül 50 ° C-ra, és adjunk hozzá 2 ml előkészített hemoglobin-oldatot, 2 ml-t a dúsító-kiegészítésből (izobitalex vagy britalex), és 2 ml-t a gátlási kiegészítőből. Keverjük össze és steril petri-csészékben tálaljuk.

Hagyja megszilárdulni és hűtőszekrényben tárolni a használatig.

Az előkészített közeg színe cseresznye vörös. A közeg végső pH-ja 7,2 ± 0,2

Módosított Thayer Martin Agar

Mérjünk 8,2 g dehidratált GC táptalajt és 100 ml-ben szuszpendáljuk. Adjunk hozzá 1 g agart, és adjunk hozzá 0,3 g glükózt. Keverjük össze és forraljuk 1 percig, gyakori keverés mellett, hogy teljesen feloldódjon. Sterilizáljuk az elegyet autoklávban 121 ° C-on 15 percig.

A hemoglobin és a dúsítás kiegészítése a fent leírtak szerint készíthető.

A gátlási kiegészítés a V.C.N.T (vancomycin, colistin, nystatin, trimetoprim)..

-előkészített

Folytassa az eredeti Thayer Martin agar esetében leírtakat.

használat

A Thayer Martin agart a minták vetése előtt temperálni kell. A leggyakrabban használt minták a garat exudátumok, orrváladékok, hüvelyi, húgycső és / vagy rektális szekréció és a CSF..

Használjon frissen vett mintákat, és erős inokulátumokat készítsen az agaron. A mintákat közvetlenül az anyagkisüléssel vetik fel, majd a felületen a kimerülést követik.

A lemezeket 35-37 ° C-on inkubáljuk 24-48 órán át mikroaerofil edényben (5% CO₂). Az inkubációs periódus végén a lemezeket kis, szürke és néha nyálkahártya-szerű telepek esetében vizsgáljuk..

Gram- és megerősítő biokémiai vizsgálatokat végezzen gyanús telepekre.

Minőségellenőrzés

A Thayer Martin agar minőségellenőrzéséhez az alábbi mikrobiális törzsek használhatók.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 és Neisseria meningitidis ATCC 13090; mindkét törzsben kielégítő fejlődés várható.

A következő törzseket is fel kell venni: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 és Candida albicans ATCC 10231. Ebben a közegben mindegyikben teljes vagy részleges gátlás várható.

korlátozások

-Emlékeztetni kell arra, hogy az alkalmazott inhibitorokkal szemben rezisztens baktériumok növekedhetnek a közegben..

-Vannak törzsek Neisseria gonorrhoeae amely érzékeny lehet a használt vankomicin koncentrációjára. Ezért ajánlott párhuzamosan isovitalextel kiegészített csokoládé-agar használata, de inhibitorok nélkül.

-Vannak olyan törzsek, amelyek rezisztensek a nisztatinra, amelyek ebben a táptalajban növekedhetnek, és zavarják a patogén Neisseria, különösen a gonokokok izolálását..

referenciák

1. Valtek diagnosztikai laboratóriumok. Agar Thayer-Martin.2016. Elérhető: com
2. Laboratóriumok Britania. Thayer Martin módosított közeg. 2010. Elérhető: britanialab.com
3. Wikipédia közreműködők. Thayer-Martin agar. Wikipédia, The Free Encyclopedia. 2017. október 26., 16:33 UTC. Elérhető: wikipedia.org4. Hozzáférés 2019. február 28..
4. Laboratóriumok Britania. GC agar. 2010. Elérhető: britanialab.com.
5. Laboratóriumok BBL ™ közepes dúsítás az erős mikroorganizmusok számára. 1999. Elérhető: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.