Agar ÁME alapja, előkészítése és felhasználása



az TSI agar vagy vas hármas cukor agar egy szilárd tenyésztőközeg, amely biokémiai tesztként szolgál a Gram-negatív bacillák kezdeti azonosítására. Alapja a jelen lévő cukrok fermentációjának bizonyítása, valamint a hidrogén-szulfid és a gáz előállítása.

Összetétele és alapja nagyon hasonlít a Kligler vas tesztjéhez, azzal a különbséggel, hogy ez utóbbi csak glükózt és laktózt tartalmaz. Ehelyett, ahogy a neve is mutatja, a hármas vas vas három fermentálható szénhidrátot tartalmaz: glükózt, laktózt és szacharózt..

Ezen túlmenően a TSI tápközegnek négy fehérje-származéka van, amelyek nagyon tápláló agart alkotnak: élesztőkivonat, húskivonat, pepton és proteóz pepton. Ezenkívül tartalmaz vasfém-ammónium-szulfátot, nátrium-tioszulfátot, nátrium-kloridot, fenol-vöröset és agart.

A mikroorganizmusnak a közegben lévő glükóz fermentálására való képtelensége azonnal kizárja azt az Enterobacteriaceae családba. Ezért ez a vizsgálat elengedhetetlen annak eldöntéséhez, hogy melyik azonosítási útvonalat kell meghatározni a nemzetség és a faj meghatározásához.

Minden laboratórium eldönti, hogy működik-e a TSI agar vagy a Kligler agar agarral.

index

  • 1 Alapítvány
    • 1.1 Nátrium-klorid és agar
    • 1.2 pH-indikátor (fenolvörös)
    • 1.3. Proteinszármazékok (élesztőkivonat, húskivonat, pepton és proteóz pepton)
    • 1.4 A szénhidrátok (glükóz, laktóz és szacharóz) erjesztése
    • 1.5 Gáztermelés
    • 1.6 Nátrium-tioszulfát és vas-ammónium-szulfát (hidrogén-szulfid előállítása) \ t
  • 2 Előkészítés
  • 3 Használat
  • 4 Tömörített
  • 5 Korlátozások
  • 6 Referenciák

alapítvány

A vegyületek mindegyike a közegben egy funkciót tölt be.

Nátrium-klorid és agar

A közeg ozmotikus egyensúlyának fenntartásához nátrium-klorid szükséges. Míg az agar szilárd konzisztenciát biztosít.

PH-jelző (fenol piros)

Az előkészített tápközeg pH-ját 7,3-ra állítjuk be, és a pH-jelző (fenol-vörös) a 6.8 alatt sárgare változik. Ez azt jelenti, hogy a cukrok fermentálásával előállított kis mennyiségű sav a vörös-narancstól a sárgaig terjedő közeget váltja fel.

Ha a fermentáció nem következik be, akkor a táptalaj lúgosítása a peptonok használatával történik, vörös-narancstól erős pirosig.

Proteinszármazékok (élesztőkivonat, húskivonat, pepton és proteóz pepton)

Amikor a baktériumok metabolizálják a TSI agarban lévő fehérjéket, aminokat termelnek, amelyek lúgosítják a táptalajt (főként ferde szinten), mert a reakció oxigént igényel. Az aminok erősen pirossá teszik a keretet.

Ez azonban attól függ, hogy a baktériumok képesek-e szénhidrátokat erjeszteni, vagy sem.

A szénhidrátok (glükóz, laktóz és szacharóz) erjesztése \ t

A cukrok fermentációjának vizsgálata több képet is adhat, és mindegyikük másképp értelmezhető. A vizsgálat értelmezése három kategóriába sorolja a mikroorganizmusokat: nem glükóz fermentorok, nem laktóz fermentorok és laktóz / szacharóz fermentorok.

Meg kell jegyezni, hogy a közegben a glükóz mennyisége korlátozott, míg a laktóz és szacharóz koncentrációja 10-szer nagyobb.

Az Enterobacteriaceae család baktériumai és más glükóz-fermentáló mikroorganizmusok elkezdenek fermentálni ezt a cukrot, mivel ez a legegyszerűbb szénhidrát az energia számára..

Másrészt a laktóz és a szacharóz olyan összetett szénhidrátok, amelyeket bontani kell és glükózzá kell átalakítani, hogy beléphessenek az Embden-Meyerhof ciklusba.

-Nem fermentáló glükóz mikroorganizmusok

Amikor a beoltott mikroorganizmus nem képes fermentálni a glükózt, sokkal kevésbé képes más szénhidrátokat fermentálni. Ezért itt nem képződnek savak, de aminosav keletkezik a ferdén a peptonok alkalmazása miatt.

Ebben az esetben a kanyar erősebb vörösre változik, és a cső alja változatlan marad, vagy lúgosítható, így a teljes piros cső marad.

Értelmezés: K / K jelentése lúgos vagy lúgos vagy semleges háttér

A cikk elején lévő képen lásd a D cső képét.

Ez az eredmény azt jelzi, hogy a mikroorganizmus nem tartozik az Enterobacteriaceae családba.

-A laktóz / szacharóz nem fermentáló mikroorganizmusai

Ha a baktériumok képesek a glükózt, de nem laktózt vagy szacharózt erjeszteni, akkor az alábbiak történnek:

A baktérium az összes glükózt körülbelül 6–8 óra elteltével fogyasztja, és képes mind a ferde, mind a taco savanyítására; azaz az agar teljesen sárga lesz. A glükóz kimerülése és a laktóz és szacharóz használatának elmulasztása esetén a baktériumok megkezdik a fehérjék metabolizmusát..

Ez a reakció oxigént igényel, ezért a peptonok lebomlása a felületen történik (ferde). Az aminok sárgára pirosra váltva lúgosítják a keretet. Ezt a reakciót 18-24 órás inkubációval bizonyítjuk.

Értelmezés: A K / A jelentése lúgos kúp és savas taco.

A cikk elején lévő képen a B cső képe látható.

-Laktóz / szacharóz fermentáló mikroorganizmusok

Nyilvánvaló, hogy a laktóz és szacharóz fermentálására képes mikroorganizmusok képesek a glükóz fermentálására. Miután a tápközegben lévő minimális mennyiségű glükóz kimerült, a képződött piruvát a Krebs aerob ciklusán keresztül savaként metabolizálódik, és a 8-12 órás időszakban az összes közeg sárga lesz..

Ha a baktériumok képesek a laktóz vagy szacharóz szétbontására, a savak továbbra is keletkeznek, és 18 és 24 óra elteltével a teljes cső - csőr és taco - sárga marad..

Meg kell jegyezni, hogy a glükóz használata kétféleképpen történik: az egyik aerob formában a cső ferdén, a másik anaerob módon a cső alján..

Tolmácsolás: A / A jelentése savas fázis / sav alsó rész. Gázt jeleníthet meg, vagy sem.

A cikk elején lévő képen az A cső képe látható.

Gáztermelés

Egyes mikroorganizmusok képesek a cukrok fermentálása során gáz előállítására. A gázt a csőben az agar belsejében kifejtett nyomás bizonyítja. A nyomás a buborékok kialakulását vagy az agar elmozdulását okozza. Néha a gázképződés megtöri a közeget.

Fontos, hogy a TSI tápközeg beoltása idején a lyukasztás tiszta legyen az agar közepén, amíg az el nem éri az alját. Ha a lyukasztás a cső falai felé irányul, akkor hamis pozitív eredményeket okozhat a gáz előállításában, mivel a rosszul kialakított csatornán keresztül fog menekülni.

A gáz előállítása, valamint az agar dőlésű reakciói oxigénre szorulnak, ezért ajánlott, hogy a csövet pamut dugóval fedjék fel, és ha bakelit fedelet használnak, akkor azt nem szabad teljesen beállítani..

A gáztermelés pozitív (+) vagy negatív (-) jelentésben szerepel..

Nátrium-tioszulfát és vas-ammónium-szulfát (hidrogén-szulfid előállítása) \ t

A hidrogén-szulfidot (színtelen gáz) termelő baktériumok vesznek a közegben jelen lévő nátrium-tioszulfát ként. A H kialakulása után2S vas-ammónium-szulfáttal reagál, és vas-szulfidot képez (fekete csapadék látható).

A H termelése2S jelentése pozitív (+) vagy negatív (-).

A cikk elején lévő képen a C cső képe látható.

előkészítés

Mérjünk be 62,5 g dehidratált hármascukor cukrot (TSI), és oldjunk fel egy liter desztillált vízben.

Melegítsük addig, amíg az agar teljesen fel nem oldódik. Forraljuk fel egy percig gyakran. A táptalajt 4 ml-t elosztjuk 13/100 kémcsőben pamut fedéllel.

Sterilizáljuk autoklávban 121 ° C-on 15 percig. Távolítsa el az autoklávból, és engedje meg, hogy ferde úton nyugszik. Ügyelni kell arra, hogy mind az alap, mind a keret azonos távolságban legyen.

Hűtőszekrényben 2-8 ° C-on tárolandó. A baktériumtörzs beültetése előtt hagyjuk enyhíteni.

A dehidratált közeg színe világos bézs és az előkészített közeg vörös-narancssárga

Az elkészített közeg végső pH-ja 7,3 ± 0,2.

alkalmazások

Az ÁME-tesztet széles körben használják a mikrobiológiai laboratórium szintjén. Ez a vizsgálat elengedhetetlen ahhoz, hogy meghatározzuk a teszt típusát, amelyet a nemzetség és a faj azonosítása érdekében kell alkalmazni. Jó végrehajtása és értelmezése az anyagot és a munkát megmentheti.

Ha az eredmény T / K K / K érték, és a citokróm oxidáz teszt pozitív, akkor ismert, hogy a nem-fermentáló Gram-negatív bacillák, például a Pseudomonas, az Alcaligen, az Achromobacter, a Burkholderia, azonosítására. Ha negatív oxidáz, akkor az Acinetobacter, Stenotrophomonas stb..

Másrészről, ha egy A / A vagy K / A TSI-t kapunk, és a citokróm oxidáz teszt negatív, annál több nitrátot redukálnak nitritekké, biztosak vagyunk abban, hogy ez az Enterobacteriaceae családba tartozó mikroorganizmus. Ebben az esetben az azonosítási útvonal a baktériumok e csoportjának specifikus tesztjeire irányul.

Másrészről, ha K / A vagy A / A képet kapunk, és a citokróm oxidáz teszt pozitív, akkor a kiegészítő vizsgálatokat az Enterobacteriaceae családba nem tartozó fermentációs törzsek azonosítására irányítjuk, mint például: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio és Pasteurella.

A hidrogén-szulfiddal, negatív oxidázzal rendelkező TSI irányítja az Enterobacteriaceae család következő nemzetségeinek azonosítását: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella vagy Salmonella.

Egy ritkán vagy mérsékelten hidrogén-szulfiddal rendelkező alkáli fenekű alkáli fenékkel és pozitív oxidázzal rendelkező TSI irányítja a G-negatív, nem fermentáló bacillák előállítására szolgáló tesztek alkalmazását.2S, mint például Shewanella putrefaciens.

Végül, az ÁME felhasználható a hidrogén-szulfid Gram-pozitív bacillákban történő előállításának vizsgálatára, különösen akkor, ha gyanúja van Erysipelothrix rhusiopathiae.

beültetett

A TSI táptalajt tiszta kolóniákkal kell beoltani, amelyet primer vagy szelektív tenyészetekben izolálnak. Ha a telepet szelektív táptalajból vettük, amelyet kevert növényvilágú mintákkal vittünk be, ügyelni kell arra, hogy csak a felületet vegyük fel, mivel a kolónia alsó részén életképes törzsek lehetnek gátolva ebben a táptalajban.

Ezért a hurkot soha nem szabad szelektív közegben hűlni, hogy a kolóniát átvegye és TSI közeget inokuláljon.

Az ültetés egyenes hurokkal vagy tűvel történik. Megtörténik a lyukasztás, ügyelve arra, hogy a középső közepen keresztül érje el az alját, majd az ültetés véglegesen beoltja a felületet. Ne tegyen két lyukasztást.

Inkubáljuk 37 ° C-on aerobiosisban 18-24 órán keresztül. Értesítsen most, sem mielőtt, sem utána.

korlátozások

Az ÁME-vizsgálatot 18–24 órás inkubálás között kell elolvasni. Az idő előtti leolvasás hamis pozitív értéket adhat az A / A fermentációnak Míg az ezen idő után végzett olvasás a nem-fermentor hamis negatív képét eredményezheti, a tápközeget lúgosító peptonok fogyasztása miatt.

referenciák

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokémiai vizsgálatok klinikai jelentőségű baktériumok azonosítására. 3. szerk. Szerkesztői Panamericana. Buenos Aires Argentína.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. 5. ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.
  4. "TSI agar." Wikipédia, A szabad enciklopédia. 2018. július 10., 08:09 UTC. Feb 10 2019, 03:33 Elérhető: en.wikipedia.org
  5. Laboratóriumok Britania. TSI agar (háromszoros cukor vas agar). 2015-ben elérhető: britanialab.com
  6. BD laboratóriumok Háromszoros cukor vas agar (TSI Agar). 2003. Elérhető: bd.com