Vogel-Johnson Agar alapítvány, előkészítés és felhasználás

az Vogel-Johnson agar egy szilárd, szelektív és differenciált tenyésztő táptalaj, amelyet kifejezetten az izolálásra terveztek Staphylococcus aureus. Ezt a médiumot Vogel és Johnson 1960-ban a Zebovitz, Evans és Niven által készített glicin-tellurit agar módosításával hozták létre..

A módosítás magában foglalja a közegben jelenlévő mannitol koncentrációjának növelését és egy pH indikátor beépítését. A jelenlegi képlet tripteinből, élesztőkivonatból, mannitból, dikálium-foszfátból, lítium-kloridból, glicinből, fenolvörösből, agarból, 1% -os kálium-tellurit oldatból és vízből áll..

Meg kell jegyezni, hogy vannak más eszközök is, amelyek - mint Vogel-Johnson agar - szelektívek a szigetelésre S. aureus, például sózott mannit-agar és Baird Parker agar. Ebben az értelemben elmondható, hogy a Vogel-Johnson agar alapja a sós mannit agar és a Baird Parker agar keveréke..

Az első a kolóniák S. aureus Ezeket megkülönböztetik a mannit erjesztésével és a pH-jelző sárga színűvé tételével. Másrészt a másodikban a S. aureus azt jellemzi, hogy a telluritot telluriumra redukáljuk, és szürke-fekete kolóniát képezünk. Mindkét tulajdonságot Vogel-Johnson agarban figyelték meg.

Ez a közeg, mint a társai, hasznos a Staphylococcus aureus az élelmiszer-mintákban, az ipari termékek egészségügyi ellenőrzésében és a klinikai mintákban.

index

• 1 Alapítvány
  • 1.1 A tápanyagok hozzájárulása
  • 1.2 Szelektív teljesítmény
  • 1.3
  • 1.4 Osmotikus egyensúly és szilárdítószer
• 2 Előkészítés
  • 2,1 1 tömeg% kálium-tellurit oldat
  • 2.2 Vogel-Johnson agar alapanyag
• 3 Használja
• 4 Minőségellenőrzés
• 5 Referenciák

alapítvány

A tápanyagok hozzájárulása

A Vogel-Johnson közeg tripteint és élesztőkivonatot tartalmaz; mindkét anyag hosszú szénláncú aminosavakat biztosít, amelyek szén- és nitrogénforrásként szolgálnak a bakteriális növekedéshez. Az e közegben növekvő baktériumok a tápanyagokat ezekből az anyagokból vesznek.

Szelektív teljesítmény

A Vogel-Johnson agar képes gátolni a Gram-negatív baktériumok és még néhány Gram-pozitív baktérium növekedését is, elősegítve a koaguláz-pozitív staphylococcusok fejlődését. A gátló anyagok a kálium-tellurit, a lítium-klorid és a glicin.

Differenciálerő

A differenciált táptalajt létrehozó anyagok mannit és kálium-tellurit. A mannit egy szénhidrát, és amikor erjesztik, savakat termelnek, amelyek a közeget vörösről sárgare váltják, ami a fenol-vörös pH-jelző jelenlétének köszönhető..

Míg a színtelen tellurit, ha fémmentes telluriddá redukálódik, sötét szürke vagy fekete színű.

az Staphylococcus aureus a mannitot és csökkenti a telluritot a telluriumra. Ezért a tipikus kolóniák S. aureus ebben a közegben szürke vagy fekete, sárga közeggel körülvéve.

Az ebben a táptalajban növekvő baktériumok, amelyek nem csökkentik a telluritot vagy erjedő mannitot, átlátszó kolóniákat képeznek, amelyeket piros közeg vesz körül, még az intenzívebbé, mint az eredeti színt, a tápközeg peptidekkel történő lúgosítása miatt..

Másrészről a telluritot csökkentő, de nem mannitot erjesztő baktériumok szürke vagy fekete kolóniákként fognak növekedni, melyet mélyvörös szín jellemez..

Ha a tápközeget kálium-tellurit hozzáadása nélkül állítottuk elő, akkor a kolóniák S. aureus sárga kolóniákként fejlődnek, sárga közeggel körülvéve, például sós mannit-agarban.

Ozmotikus egyensúly és szilárdítószer

A dikálium-foszfát fenntartja a tápközeg ozmotikus egyensúlyát és a pH-t semlegesre állítja. 7.2. Miközben az agar szilárd konzisztenciát ad a tápközegnek.

előkészítés

1% kálium-tellurit oldat w / v

Ez a megoldás nem szerepel a dehidratált közegben, mert nem sterilizálható autoklávban. Ezért külön-külön állítjuk elő, és a sterilizált közeghez adjuk.

Egyes kereskedelmi házak felhasználásra kész 1% -os kálium-tellurit oldatot értékesítenek. Ha a laboratóriumban kíván felkészülni, tegye a következőket:

Mérjünk be 1,0 g kálium-telluritot, és mérjünk 100 ml desztillált vizet. A kálium telluritját vízben feloldjuk, majd a vízmennyiséget 100 ml-re elérjük. Az oldatot szűréssel sterilizáljuk.

Vogel-Johnson agar alapanyag

Mérjünk be 60 g dehidratált közeget, és 1 liter desztillált vízben oldjuk. A keveréket forrásig melegítjük, hogy segítsük a teljes oldódást. Az oldódási folyamat során a tápközeget gyakran keverjük.

Sterilizáljuk autoklávban 15 font nyomáson és 121 ° C-on 15 percig. Távolítsuk el az autoklávból, és hagyjuk állni, amíg a tápközeg hőmérséklete körülbelül 45-50 ° C. Adjunk hozzá 20 ml előzőleg elkészített kálium-tellurit oldatot 1% -ra.

Keverjük össze és öntsük steril petri-csészékbe. Hagyjuk megszilárdulni és megfordítani a lapokat a későbbiekben a hűtőszekrényben történő tároláshoz.

Az elkészített közeg végső pH-jának 7,2 ± 0,2 értéknek kell lennie.

A minta telepítése előtt várjon, amíg a lemez a környezeti hőmérsékletet veszi.

Az előkészített közeg színe piros.

használat

Bár használható az izoláláshoz S. aureus bármilyen típusú mintában a gyógyszeripari termékek, kozmetikumok és élelmiszerek mikrobiológiai elemzésére használják.

Javasoljuk, hogy az inokulum legyen sűrű. A vetést platina fogantyúval vagy Drigalski spatulával való felületen végezhetjük.

A lemezeket 35-37 ° C-on inkubáljuk 24-48 órán át aerobiosisban.

Minőségellenőrzés

A Vogel-Johnson közeg minőségellenőrzéséhez a következő kontrolltörzsek használhatók:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 vagy Proteus mirabilis ATCC 43071.

A várt eredmény a következő: a. \ T S. aureus A sárga tápközeggel körülvett fekete telepek kielégítő növekedése. hogy S. epidermidis rendszeres növekedés áttetsző vagy fekete kolóniákkal, amelyeket vörös közeg vesz körül.

Hasonlóképpen E. coli várható, hogy teljes gátlást fog elérni Proteus mirabilis részleges vagy teljes gátlás; ha növekszik, akkor ezt enyhén fogják csinálni, és a telepek közepesen piros színűek lesznek.

referenciák

1. BD laboratóriumok. VJ (Vogel és Johnson Agar). 2006. Elérhető: bd.com
2. Laboratóriumok Britania. Vogel-Johnson Agar. 2015-ben elérhető: britanialab.com
3. Laboratóriumok Britania. Kálium-tellurit. 2015. Elérhető: britania.com
4. Himedia Laboratory. Vogel-Johnson Agar közeg. 2018. Rendelkezésre áll: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Vogel-Johnson Agar Base. Merck Mikrobiológiai Kézikönyv. 12. kiadás, 502-503. Oldal. Elérhető: Felhasználók / Csapat / Letöltések
6. A Wikipédia közreműködői, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia az enciklopédikus életre,   disponível em: wikipedia.org.
7. Venezuelai szabvány Covenin 1292-89. (1989). Food. Szigetelés és számlálás Staphylococcus aureus. Elérhető:sencamer.gob.ve