Pepton vízalapítvány, előkészítés és felhasználás

az peptonada víz ez egy nem szelektív folyékony dúsító közeg, amelyet főleg élelmiszer-minták vagy más anyagok hígítóanyagaként használnak. Ez azt jelenti, hogy kémiai szempontból nagyon egyszerű, hús, nátrium-klorid és víz peptont tartalmaz.

Bizonyos tápértéke van, lehetővé téve a minta gazdagítását. Ha baktériumok vannak, ez azt jelenti, hogy képes az életképesség javítására. Különösen hasznos az Enterobacteriaceae családba tartozó baktériumok visszanyerésében.

Salmonellák visszanyerése esetén a pufferelt peptonada vízváltozat használata javasolt; Ez a minta előzetes dúsítására szolgál, ebben az esetben más elemeket, például dinátrium-foszfátot és dikálium-foszfátot tartalmaz..

Általában a peptonada vizet semleges pH-n állítjuk elő, de vannak más változatok is, ahol a pH-érték 8,5 ± 0,2 (lúgos), mivel az izolálandó baktériumok alkalofilek, például a Vibrio cholerae.

Másrészt, ez a közeg használható szénhidrát fermentációs tesztek alapanyagaként.

index

• 1 Alapítvány
• 2 Előkészítés
  • 2.1 Házi készítés (nem kereskedelmi célú)
  • 2.2 Előkészítés kereskedelmi közeggel
  • 2.3 A fermentációs vizsgálatok előkészítése
  • 2.4 A peptonada víz egyéb változatai
• 3 Használja
  • 3.1 Székletminták
  • 3.2 Élelmiszerminták
• 4 Minőségellenőrzés
• 5 Korlátozások
• 6 Referenciák

alapítvány

A peptidek biztosítják a baktériumfejlesztéshez szükséges tápanyagokat, különösen a nitrogén- és rövid láncú aminosavakat, míg a nátrium-klorid fenntartja az ozmotikus egyensúlyt.

Ezenkívül a közeg lehetővé teszi az ipari folyamatok által károsított baktériumsejtek diszpergálását, homogenizálását és javítását..

Hígítószerként ideális a fiziológiai oldat (SSF) vagy a foszfátpuffer (PBS) helyettesítése..

A bakteriális növekedés nyilvánvaló a zavarosság megfigyelésével.

előkészítés

Házi készítés (nem kereskedelmi)

Mérjünk be 1 g peptont és 8,5 g nátrium-kloridot, 1 liter desztillált vízben oldjuk. A pH-t 7,0-ra kell beállítani. Ehhez 1 N nátrium-kloridot használhat.

Előállítás kereskedelmi közeggel

Mérjünk le 15 g dehidratált táptalajt és oldjunk fel egy liter desztillált vízben. Homogenizáljuk a keveréket. Szükség esetén a keveréket 1 percig forraljuk a teljes feloldódás érdekében. 100 ml-es injekciós üvegben vagy 10 ml-es csövekben tálaljuk. Autokláv 121 ° C-on 15 percig.

Hűtsük le, és hűtőszekrényben tároljuk. A közeg végső pH-ja 7,2 ± 0,2.

A dehidratált közeg színe világos bézs színű és világos borostyánszínű.

Előkészítés fermentációs vizsgálatokhoz

Az előző készítményhez - sterilizálás előtt - a szénhidrátot hozzá kell adni 1% végkoncentrációhoz, valamint az Andrade indikátorhoz (savas fukszin) vagy fenolvöröshez (0,018 g / l). A gázképződés megfigyelésére szolgáló Durham-harangot a csövekre kell helyezni.

Egyéb peptonada vízváltozatok

-Peptonvíz pufferelt vagy pufferolt

Tartalmaz kazein enzimatikus hidrolizátumot, nátrium-kloridot, kálium-dihidrogén-foszfátot és nátrium-hidrogén-foszfát-dodekahidrátot. A végső pH 7,0 ± 0,2.

Az elkészítéshez 20 g dehidratált közeget mérünk, és 1 liter desztillált vízben oldjuk. Hagyjuk állni 5 percig. Melegítsük 1 percig, amíg teljesen fel nem oldódik.

Szükség esetén öntsön megfelelő üvegbe. Sterilizáljuk az autoklávot 121 ° C-on 15 percig.

-Alkáli peptonozott víz

Mérjünk le 25 g dehidratált közeget, és 1 liter vízben oldjuk. A fent leírtak szerint járjon el. A pH 8,3 és 8,7 között van.

használat

Az inokulumot közvetlenül a minta elhelyezésével végezzük.

Ezt a mintát a minták hígítására használják, különösen akkor, ha gyanítható, hogy károsodott baktériumok lehetnek. Általában a hígítások 1:10 és 1: 100.

Inkubáljuk 24 órán át aerobiosisban 35-37 ° C-on.

Székletminták

A szalmonellát kereső székletminták esetében ajánlott a pufferolt vagy pufferolt víz használata a dúsítás előtti közegként..

Ehhez tegye a következőket:

Ha a széklet képződik, vegyél 1 g mintát. Ha folyékonyak, vegyük be 1 ml székletet és 10 ml pufferolt peptonozott vízzel csőbe szuszpendáljuk. A rektális tamponok esetében a tamponban lévő anyagot pufferelt peptonozott vízzel a csőbe engedjük.

Minden esetben jól keverjük össze és homogenizáljuk a mintát.

Inkubáljuk 37 ° C-on 18-24 órán keresztül. Ezt követően egy dúsító tápközegben, például szelenit cisztin-táptalajban vagy tetrationát-táptalajban tenyésztjük 37 ° C-on 18-24 órán át. Végül szelektív tápközegben tenyésztjük a szalmonellát, például SS agart, XLD agart, Hektoen agart, többek között.

Élelmiszerminták

A peptonvizet gazdagító közegként vagy egyszerű hígítószerként használjuk, de ha Salmonella fajokat keresünk, akkor azt előzetesen dúsító közegként használjuk, amint azt már leírtuk..

Az élelmiszerekben az alábbiak szerint járnak el:

A szilárd élelmiszerek esetében a minta 25 g-ját és a folyékony élelmiszerek esetében 25 ml-t mérünk. Helyezzük az említett adagot 225 ml peptonozott vizet tartalmazó lombikba. Keverjük össze és homogenizáljuk a mintát.

Ha feltételezhető, hogy a mikrobiális terhelés magas sorozathígításokat vagy tizedeseket lehet tenni a telepképző egységek (CFU) számlálásának megkönnyítésére.

A hígítások száma a minta típusától és az analitikai tapasztalatoktól függ.

Ellenkező esetben feltételezhető, hogy a mikrobiális terhelés nagyon alacsony, nem szükséges hígításokat készíteni. Ezt követően szelektív médiában szubkultiválják.

A tengerből származó élelmiszerek, mint például a tenger gyümölcsei, a halak között többek között hal Vibrio cholerae vagy más Vibrio-fajokat, a pH 8,5-re beállított peptonvizet kell alkalmazni (lúgos peptonozott víz).

Minőségellenőrzés

Minden elkészített tételből egy-két csövet inkubálhatunk beoltás nélkül 24 órán át aerobiosisban 37 ° C-on. Az idő végén nem figyelhető meg zavarosság vagy színváltozás.

Ismeretes kontrolltörzsek is felhasználhatók hatékonyságuk értékelésére:

Ehhez az alábbi baktériumtörzsek használhatók: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Minden esetben kielégítő mikrobiális fejlődés várható, amelyet a közeg zavarossága figyelhet meg.

korlátozások

-A dehidratált közeg nagyon higroszkópos, ezért a nedvességtől távol kell tartani.

-A tápközeget nem szabad használni, ha valamilyen romlás figyelhető meg.

-A dehidratált táptalajt 10 - 35 ° C között kell tárolni

-Az előkészített tápközeget hűtőszekrényben (2-8 ° C) kell tartani..

referenciák

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B és Velázquez O. Az élelmiszerek mikrobiológiai elemzésének módszerei. 2009, 2. kiadás. Kémiai Kar, UNAM. Mexikóban. A Kémiai Kar kézikönyvei és dokumentumai (AMyD) adminisztrátorának verziója, UNAM 1. Elérhető: http://depa.fquim.unam.mx
2. Laboratóriumok Britania. Pufferált peptonada víz. 2015-ben elérhető: britanialab.com
3. Neogen Laboratories Pepton víz. Elérhető: foodsafety.neogen.com
4. Laboratóriumok Britania. Pepton víz. 2015-ben elérhető: britanialab.com
5. Merck Laboratories Pufferált peptonvíz. Elérhető: merckmillipore.com
6. Laboratóriumok Conda Pronadisa. Alkáli peptonozott víz. Elérhető: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Szerkesztői Panamericana S.A. Argentína.