Spore festő alapítvány, technikák és felhasználások

az spórafestés az a módszer, amelyet a rezisztencia-struktúrák színezésére használnak, amelyek bizonyos baktérium-nemzetségeket alkotnak, ha kedvezőtlen körülmények között vannak; ezek a struktúrák megfelelnek a túlélés módjának.

Sok nemzetség van, amely spórákat alkot; a főbbek azonban a Bacillus és a Clostridium. Ezeket a nemzetségeket sokkal relevánsabbnak tekintik, mert patogén fajuk van az emberek számára.

Minden bacillus egy spórát okozhat. A készítmény festése idején a spórát a bacillus (endospore) vagy annak külső részén (exospore) találhatjuk. A baktériumok szokásos festési technikáival - mint például a Gram festékkel - a spórák színtelenek maradnak.

Jelenleg számos színező módszer létezik, amelyek képesek áthatolni a spóra vastag szerkezetét annak festésére. Ezek a módszerek nagyon változatosak; ezek közül említhetjük a Dorner-technikát, a Möeller-foltot és a Shaeffer-Fulton-módszert, amelyet Wirtz-Conklin néven is ismertek..

Az említett technikák közül a Shaeffer-Fulton módszertan a leggyakrabban használt rutin laboratóriumokban. Nevét két mikrobiológusnak köszönheti, akik 1930-ban alkották meg a színezést: Alicia Shaeffer és MacDonald Fulton. Néha azonban a technikát Wirtz-Conklinnak nevezik az 1900-as évek két bakteriológusának tiszteletére.

index

• 1 Alapítvány
• 2 Spore színező technikák
  • 2.1 Dorner technikája
  • 2.2 Módosított Dorner technika
  • 2.3 Shaeffer-Fulton vagy Wirtz-Conklin technikája
  • 2.4 Möeller technika
  • 2.5 Módosított Möeller technika hő nélkül
• 3 Használat
  • 3.1 Példák
• 4 Referenciák

alapítvány

A spórák nem festenek hagyományos színezéseket, mert nagyon vastag faluk van. A spórák összetett összetétele megakadályozza a legtöbb festék belépését.

Ha a spórákat kívülről tanulmányozzák, a következő rétegek figyelhetők meg: először az exosporium, amely a glikoproteinek által képzett legvékonyabb külső réteg..

Ezután jön a kutikula, amely ellenáll a magas hőmérsékletnek, majd a peptidoglikánból álló kéreg. Aztán ott van a bázis fala, amely megvédi a protoplasztot.

A spóra egy dehidratált szerkezet, amely 15% kalciumot és dipikolin-savat tartalmaz. Ezért a legtöbb spóra színező technika a hő alkalmazásán alapul, így a festék behatolhat a vastag szerkezetbe.

Miután a spórát festették, nem tudja megszüntetni a festéket. A Shaeffer-Fulton technikában a malachit zöld belép a vegetatív sejtekbe, és hő alkalmazása után behatol az endospórába és az exosporokba is..

Vízzel való mosáskor a festéket eltávolítják a vegetatív sejtből. Ez azért fordul elő, mert a zöld malachit festék kissé bázikus, ezért gyengén kötődik a vegetatív sejthez.

Másrészről, nem tud kijutni a spórából, és végül a szafraninnal rendelkező bacillus ellentétes. Ez az alapítvány a többi technikára érvényes, amelyben valami hasonló történik.

Spore színező technikák

Annak érdekében, hogy a spórák foltok legyenek, a gyanús gyanús törzs tiszta kultúrájával kell rendelkeznie.

A tenyészetet 24 órán át extrém hőmérsékletnek vetjük alá, hogy stimuláljuk a mikroorganizmus sporulálódását. Ehhez a tenyészetet 44 ° C-os kemencébe vagy 8 ° C-os hűtőszekrénybe helyezhetjük 24 vagy 48 órán át.

Ha túl sok idő marad a megemlített hőmérsékleten, csak exosporok figyelhetők meg, mivel az összes endoszkóp elhagyja a bacillust.

Az idő végén néhány csepp steril fiziológiai oldatot egy tiszta csúszdára kell helyezni. Ezután a termés egy kis részét veszik fel, és finom eloszlás készül. 

Ezután megszárad, majd a hőre rögzül, és az alábbiakban ismertetett technikákkal festik:

Dorner technikája

1. Készítsünk egy kémcsőben koncentrált szuszpenziót a sporulált mikroorganizmusból desztillált vízben, és adjunk hozzá azonos térfogatú szűrt Kinyoun fenolos fukszint.

2- Helyezze a csövet forró vízzel fürdőbe 5-10 percig.

3- Egy tiszta lemezen keverjen össze egy csepp előző szuszpenziót egy csepp 10% -os nigrosin vizes oldattal, főzzük és szűrjük.

4- Gyors melegítéssel hosszabbítsa meg és szárítsa meg.

5- 100X objektív vizsgálata (merítés).

A spórák pirossá válnak, és a baktériumsejtek szinte szürkésnek tűnnek sötét szürke háttérrel szemben.

Módosított Dorner technika

1 - A sporulált mikroorganizmus szuszpenziója egy lemezre terjed, és a hőre rögzül.

2- A mintát szűrőpapír csíkkal borítjuk, amelyhez fenoesav-fukszint adunk. A festéket 5-7 percig melegítjük a Bunsen égő lángjával, amíg a gőzök felszabadulnak. Ezután eltávolítjuk a papírt.

3 - A készítményt vízzel mossuk, majd nedvszívó papírral szárítjuk.

4- Fedjük le a kenetet 10% -os nigrosin vékony filmrel, a második csúszkával a nigrosin vagy a tű elterjedéséhez..

A spórák és a baktériumok színezése megegyezik a technika állása szerinti eljárással.

Shaeffer-Fulton vagy Wirtz-Conklin technika

1- Vékonyan szórjunk a szuszpenzióba a sporulált mikroorganizmus szuszpenziójával, és rögzítsük a hőre.

2- Fedje le a lemezt egy 5% -os malachit zöld oldattal (szűrőpapír helyezhető a lapra).

3- Melegítsük a Bunsen égő lángját, hogy gőz kerüljön ki, és eltávolítsa a lángot. Ismételje meg a műveletet 6-10 percig. Ha az eljárás során a malachit zöld oldat túlságosan elpárolog, többet lehet hozzáadni.

4- Távolítsa el a szűrőpapírt (ha elhelyezte) és mossa le vízzel.

5- Fedjük le a lemezt 0,5% -os vizes szafraninnal 30 másodpercig (a technika egyes változatai 0,1% -os vizes szafranint használnak, és 3 percig hagyják)..

Ezzel a technikával a spórák zöldek és a bacillák vörösek.

Ennek az a hátránya, hogy a fiatal kultúrák endoszporái nem foltosak jól, mert rendkívül tiszta vagy színtelen. Ennek elkerülése érdekében ajánlott 48 órás inkubációs tenyészetet használni.

Möeller technika

1- 2 percig fedjük le a kenetet kloroformmal.

2- A kloroformot dobja ki.

3 - 5 percig fedjük le 5% krómsavval.

4- Mossuk le desztillált vízzel

5- A lapot fuchsin-fenolos ponty borítja, és a gőzök kibocsátásáig a Bunsen égő lángjával érintkezik; aztán néhány pillanatig eltávolítják a lángból. A műveletet addig ismételjük, amíg el nem éri a 10 percet.

6- Mossa vízzel.

7- Használjon savanyított etanolt (sósav-alkohol) a színtelenítéshez. 20 vagy 30 másodpercig marad.

8- Mossuk le desztillált vízzel.

9 - A lapot metilénnel 5 percen át ellensúlyozza.

10- Desztillált vízzel mossuk.

11- Szárításra kerül, és a mintát mikroszkóp alatt veszik.

A spórák vörös és kék bacillák. Fontos, hogy ne lélegezzük be a gőzöket, mert mérgezőek, és hosszú távon rákkeltő lehetnek.

Módosított Möeller technika hő nélkül

2007-ben Hayama és munkatársai a Möeller-technikát módosították. Eltávolították a festék fűtési lépését, és 2 csepp Tergitol 7 felületaktív anyag hozzáadásával helyettesítették minden 10 ml fuchsin-fenolos karbololdathoz. Ugyanezeket az eredményeket kaptuk.

alkalmazások

A spórák színezése nagyon értékes és hasznos információt nyújt a kórokozó azonosításához, mivel ugyanaz, annak alakja, helye a bacillusban és a vegetatív sejt deformálásának képessége, vagy nem, az a fajta adat, amely irányíthatja a fajt. egy adott nemben.

Ebben az összefüggésben érdemes megemlíteni, hogy a spórák lehetnek kerekek vagy oválisak, lehetnek a központban vagy a paracentrális, szubterminális vagy terminális helyzetben is..

Példák

- Clostridium difficile ovális spórát képez, amely a bacillust deformálja.

- A spórája Clostridium tertium Ez ovális, nem deformálja a bacillust, és a terminál szintjén helyezkedik el.

- Az endospórus Clostridium tetani végberendezés és deformálja a bacillust, ami egy dobos megjelenését adja.

- A spórák Clostridium botulinum, C. hisztolitikoiizin, C. Novy és C. septicum kerek vagy szubterminális ovális és deformálják a bacillust.

- Az endospórus Clostridium sordelli központi helyzetben van, enyhe deformációval.

referenciák

1. Hayama M, Oana K, Kozakai T, Umeda S, Fujimoto J, Ota H, Kawakami Y. A baktérium spórák festésére szolgáló egyszerűsített technika javaslata a Moeller módszerének hő-sikeres módosítása nélkül. Eur J Med Res. 2007; 16 12 (8): 356-9.
2. Wikipédia közreműködők. Moeller folt. Wikipédia, The Free Encyclopedia. 2018. november 3., 03:28 UTC. Elérhető: en.wikipedia.org
3. Pérez R, Juárez M, Rodríguez (2011). Mikrobiológiai technológiai kézikönyv. Alaptudományi Tanszék Mikrobiológiai Akadémia. Nemzeti Műszaki Intézet.
4. „Endospórafestéket.” Wikipédia, A szabad enciklopédia. Február 25, 10:20 UTC. 2019. január 10., 02:42: en.wikipedia.org
5. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J és munkatársak. (2006). Az Extremadura autonóm közösség munkatársai. Különleges napirend IV. Szerkesztői MAD. Sevilla-Spanyolország, 211-212. Oldal.
6. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006), laboratóriumi szakember, a galíciai egészségügyi szolgálat (SERGAS). Tárgyspecifikus kötet 2. Szerkesztői MAD. Sevilla-Spanyolország, 79-80. Oldal.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. (5. kiadás). Argentína, szerkesztő Panamericana S.A..
8. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Argentínában. Panamericana S.A szerkesztő