Kinyoun festési alap és technikák

az Kinyoun festés Ez egy színező technika, amellyel savanyú baktériumok és savparaziták festhetők. A Ziehl-Neelsen színezésének módosításából született; Mindkét technikát ugyanúgy értelmezik, de két elemből különböznek: a fő reagens előkészítésében és abban, hogy a Kinyoun technika nem használja a hőt.

Emiatt hidegen módosított Ziehl-Neelsen vagy Kinyoun hidegfestésként is ismert. A színezéshez Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, atipikus mikobaktériumok, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris és Cyclosporas cayetanensis.

Érdemes megemlíteni, hogy a Nocardias gyengén foltja ezt a technikát, mivel részlegesen saválló alkohol, így ebben a műfajban változik a módszertan..

A kinyouni hidegtechnikát viszont összekapcsolták a Didier által a kokcidia kimutatására módosított trichrome technikával.Cryptosporidium parvum és Isospora belli) és a mikrosporidia spórái (Enterocytozoon bieneusi és Encephalitozoon intestinalis).

index

• 1 Alapítvány
• 2 Technika
  • 2.1 Anyagok
  • 2.2 Kinyoun fenikált fukszin előállítása
  • 2.3 Alkohol-sav előállítása
  • 2.4 A metilén-kék kontraszt festék előállítása
  • 2.5 Kinyoun folt technika
  • 2.6 Speciális Kinyoun technika Nocardias számára
  • 2.7 Didier által módosított fenolos és trichromikus fukszin kombinált technikája
  • 2.8 Minőségellenőrzés
• 3 Kinyoun technika a Ziehl technikához képest -Neelsen
• 4 Hivatkozás

alapítvány

A fő festőreagens karbol-fukszin vagy fukszin-fenicada, amely tulajdonsága, hogy kötődik a viaszos sejtfalban lévő karbolsavakhoz, a mikobaktériumok és bizonyos paraziták lipidjeiben (mikolsavakban) gazdag..

Ezt a szakadékot nem befolyásolja a savas színtelenítés; ezért a mikroorganizmusok saválló alkoholnak minősülnek.

Ellentétben a Ziehl-Neelsen technikával - amely a festéket hővel rögzíti - a Kinyoun-technikában ez a lépés nem szükséges, mivel az ehhez a technikához készített fenolos fukszin-oldat magas fenolkoncentrációt tartalmaz..

A fenol feloldja a sejtfal lipidanyagát, ami lehetővé teszi a karbol fukszin festék belépését. Miután a festék behatolt, az alkohol-savval való mosás ellenére rögzítve marad.

Ily módon a saválló mikroorganizmusok felveszik a jellegzetes vörös színt, míg minden, ami nem saválló alkohol, elszíneződik és kék színű lesz..

technika

anyagok

- Módosított fenolos fukszin.

- alkohol ecetsav.

- Metilén kék.

Kinyoun fenikált fukszin előállítása

- Basic fuchsin: 4 gr.

- Fenol: 8 ml.

- Alkohol (95%): 20 ml.

- Desztillált víz: 100 ml.

Az alkoholban lévő alap fukszint lassan fel kell oldani, folyamatosan keveredve. Ezt követően a kristályosított fenolt 56 ° C-os vízfürdőben olvasztjuk. Feloldás után adjunk hozzá 8 ml-t a fenti fuchsin-oldathoz.

Alkohol-sav előállítása

- Koncentrált sósav: 3 ml.

- Etanol (95%): 97 ml.

Meg kell mérni, összekapcsolni és összekeverni.

Metilén-kék kontraszt festék előállítása

- Metilén kék: 0,3 g.

- Desztillált víz: 100 ml.

Mérjük és feloldjuk.

Kinyoun folt technika

1- Készítsen elő egy kenetet közvetlenül a mintából, amely lehet köpet, tüdőfolyadék, vizelet üledék, cerebrospinális folyadék vagy széklet; vagy az elsődleges tenyésztőközegekben kifejlesztett tiszta telepekből nyert mikroorganizmusok szuszpenziójából.

2. Rögzítse a kenetet hővel.

3. Helyezze a kenetet a színhídra és fedje fel Kinyoun fenolos fukszin reagensét. Hagyja ülni 3 vagy 5 percig.

4- Mossuk le desztillált vízzel.

5- 3 percig savas alkohollal fehérítjük, majd desztillált vízzel ismét mossuk.

6 - Fehérítjük fel újra savas alkohollal 1 vagy 2 percig, amíg többé nem kerül festék.

7- Mossuk le desztillált vízzel és engedjük le a vizet, és helyezzük a csúszkát függőleges helyzetbe.

8- Fedjük le a készítményt metilénkékkel és hagyjuk 4 percig hagyni.

9- Mossuk le desztillált vízzel és hagyjuk megszáradni.

10 - Vizsgáljuk meg 40X-on, majd 100X-on.

Ha javítani és gyorsítani kívánja a sav-gyors mikroorganizmusok festését, adjunk hozzá 1 csepp nedvesítőszert (például a 7. tergitol) 30 vagy 40 ml Kinyoun fenolos fukszinjához..

Néhány laboratórium megváltoztatja a metilén-kék kontraszt festéket fényes zöld vagy pikánsavra; az első zöld színt ad a háttérnek, a második pedig sárga színű.

Kinyoun technika különleges Nocardias számára

A Nocardia baktériumok festésének javítása érdekében a Kinyoun festést módosítjuk. A technika a következő:

1 - 3 percig fedjük le a kenetet Kinyoun fenikált fukszinnal.

2 - Mossuk le desztillált vízzel.

3- 3% -ban elkészített savas alkohollal rövid ideig fehérítjük, amíg a festék már nem lesz bevonva.

4- Újra desztillált vízzel mossuk.

5- Fedjük le a készítményt metilénkékkel és hagyjuk 30 másodpercig hagyni.

6- Mossuk le desztillált vízzel és hagyjuk megszáradni.

Didier által módosított fenolos és trichromikus fukszin kombinált technikája

Ezt a technikát ajánljuk a székletminták elemzésére a coccidia és a spórák keresésére Microsporidium sp egyidejűleg A követendő eljárás a következő:

1-10 percig fedjük le a kinyíló fenil-fukszint.

2- Vegye ki a festéket és mosson desztillált vízzel.

3- Fehérítőszer 30 másodpercig alkoholos sósavval.

4- Újra desztillált vízzel mossuk.

5- 30 percig fedjük le a kenetet trichromoldattal 37 ° C-on.

6- Mosás desztillált vízzel.

7- 10 másodpercig elszíneződés alkoholos ecetsavval.

8- A mosófolyadékot 30 másodpercig mossuk 95% -os etanollal.

Minőségellenőrzés

Pozitív kontrollként a szennyeződéseket a törzsekkel állítjuk elő Mycobacterium tuberculosis és az előkészített reagensekkel megfestettük annak ellenőrzésére, hogy a baktériumok megfelelő színt (vörös-fukszia).

Negatív kontrollokat is használhatunk, ha kenetet állítunk elő olyan törzsekkel, amelyek nem saválló alkoholok, így ellenőrizve, hogy a teljes minta a kontraszt színét veszi-e fel..

Kinyoun technika a Ziehl technikához képest -Neelsen

A Kinyoun technika egyszerűbb, mivel megszünteti a fűtés lépését, de fő előnye, hogy megakadályozza a gőzök kibocsátását, amely hosszú távon rákot okoz. Ezért a Kinyoun festés biztonságosabb a személyzet festésére.

Fontos figyelembe venni, hogy gondoskodni kell arról, hogy a reagensek ne érintkezzenek közvetlenül a bőrrel, mivel ezek maró hatásúak és a fehérítő gyúlékony..

A hátrányok tekintetében a negatív kenet nem feltétlenül jelenti azt, hogy a mikroorganizmus nincs jelen. Emellett a sejt detritus jelenléte hamis pozitívokat okozhat, ami zavart okoz a diagnózisban.

referencia

1. Alkalmazott klinikai kémia (2016). BK Kinyoun Kit, elérhető: cromakit.es
2. Orozco-Rico Miguel. Kinyoun folt és két Coccidia HIV-ben. Medical Journal MD. 2011-ben; 3 (2): 137
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Argentínában. Panamericana S.A szerkesztő.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiológiai diagnózis. (5. kiadás). Argentína, szerkesztő Panamericana S.A..
5. Wikipédia közreműködők. - Kinyoun folt. Wikipédia, The Free Encyclopedia. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 2018. február 8. Web. 2019. január 5..
6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Színezési technika alkalmazása a Coccidia és a Microsporidia egyidejű diagnosztizálására. A Köztársasági Egyetem Higiéniai Intézete. Montevideo. Uruguayban. Elérhető: higiene.edu.uy