Május Grünwald-Giemsa alapítványa, technikája és felhasználása

az Május Grünwald-Giemsa folt o A Pappenheim egy differenciál színező technika, amely összekeveri a Giemsa és a May Grünwald reagenseket. A perifériás vér és csontvelő normál és abnormális vérsejtjeinek megkülönböztetésére, valamint szövettani szakaszok és citológiai minták festésére szolgál..

Mindkét reagens - Gemsa és May Grünwald - a Romanowsky-típusú festésből származik, amely a sav és az alapszín kombinációján alapul..

A Giemsa javította a technikát az eozin, metilén-kék és származékai keverékének glicerinnel történő stabilizálásával. Ezzel szemben May Grünwald eozint és metilén-kéket használ, oldószerként metanolt használva. Ez a stratégiai kombináció kiváló eredményeket hozott.

Bár a sejtmorfológia megfigyelése szempontjából a Giemsa és a Wright színezéséhez hasonlóan működik, ez a technika javítja az előzőeket a malária, a Chagas-kór, a leishmaniasis és a trichomoniasis okozta paraziták színének finomhangolásával..

Ezenkívül nagyon hasznosnak bizonyult a spermium folyadék citológiai vizsgálatára. Nemcsak a sperma morfológiai jellemzőinek bemutatásával, hanem a nagy hatékonysággal rendelkező leukocitákkal, epiteliális sejtekkel és spermatogenezis sejtekkel való megkülönböztetésével is kiemelték..

index

• 1 Alapítvány
  • 1.1 Különböző színezékek
• 2 Technika
  • 2.1 Anyagok
  • 2.2 Koncentrált festékoldat May Grünwald
  • 2.3 Koncentrált Giemsa festék
  • 2.4 A pufferoldat előállítása pH = 7,2
  • 2.5 Vér kenet vagy csontvelő festési eljárás
  • 2.6 A spermafolyadék kiterjesztett színező technikája
  • 2.7 Fontos előírások
• 3 Használat
  • 3.1 Vaginális citológia
  • 3.2 Sperm minta
• 4 Referenciák

alapítvány

A technika követi Romanowsky foltjait, amelyben a savas színezékek szelektív affinitással rendelkeznek a celluláris alapkomponensekhez, és a savas komponensek vonzzák az alapszíneket.

Másképpen magyarázva, mind a sejtstruktúrák, mind a színezékek pozitív vagy negatív elektromos töltéssel rendelkeznek; egyenlő díjakat vonnak vissza, és különböző díjakat vonzanak.

Például a bázikus színezékek, például a metilén-kék pozitívan töltődnek és negatív töltésű struktúrák vonzódnak. Ez az oka annak, hogy ez a festék olyan DNS-ben és RNS-ben gazdag magokat tartalmaz, amelyek negatív töltésű foszfátcsoportot tartalmaznak.

Az RNS-t tartalmazó mononukleáris fehérvérsejtek szegmentált bazofiljeinek és citoplazmáinak szemcséit szintén festik.

Hasonlóképpen, a savas festék negatív töltést hordoz, ezért csatlakozik a pozitív töltésű struktúrákhoz, például az eritrocitákhoz és a szegmentált eozinofilek szemcséihez. Ami a szegmentált neutrofilek granulátumát illeti, ezek mindkét színezéket rögzítik.

Különböző színezőanyagok

Ebben a technikában az ortokromatikus festékek és a metakromatikumok közötti reakciók együttesen léteznek. Az ortokromatikumok (eozin és metilén-kék) kötődnek a sejtstruktúrához, amelyhez kapcsolódnak, és stabil színt adnak, amely nem változik.

Másrészről a metakromatikumok (a metilén-kék azúr A és azúrkék B származékai) eredeti színüket megváltoztatják, miután kötődnek az adott szerkezethez, és még sokféle árnyalat is lehet.

Végül, a May Grünwald-megoldás által végrehajtott lépéshez víz szükséges, mert anélkül a festék behatol a struktúrákba, de nem lesz rögzítve. Ahhoz, hogy ez bekövetkezzen, a festéknek polárisnak vagy ionizáltnak kell lennie, és így képesnek kell lennie kicsapódni és kapcsolódni a kapcsolódó szerkezetekhez.

technika

anyagok

- Dia tárgyak.

- Színező hidak.

- May-Grünwald megoldása.

- Giemsa folt.

- Desztillált víz.

Koncentrált festékoldat May Grünwald

0,25 g eozin-metilén-kéket (May Grünwald szerint festék) kell mérnünk, és 100 ml metanolban fel kell oldani. Az elegyet ezután 1 órán át keverjük, és 24 órán át hagyjuk pihenni. Befejezte az időt, szűri.

A technika alkalmazásához a May Grünwald festéket az alábbiak szerint kell hígítani: 200 ml hígított festék esetében 30 ml koncentrált oldatot mérünk, 20 ml pufferoldatot és 150 ml desztillált vizet adunk hozzá pH = 7,2-7,3 értékre. . Ezután összekeverjük és szűrjük.

Koncentrált Giemsa festék

Mérjünk be 0,5 g azur-eozin-metilén-kéket (festék a Giemsa szerint), feloldjuk 50 ml metanolban, és 50 ml glicerint helyezünk a keverékbe.

A technika végrehajtásához 1:10 oldatot pufferoldattal hígítsunk, és hagyjuk 10 percig pihenni. Szükség esetén szűrhető.

A pufferoldat előállítása pH = 7,2

Meg kell mérni:

- 40 mg kálium-di-hidrogén-foszfát (KH2PO4).

- 151 mg di-nátrium-hidrogén-foszfát-12-hidrát (Na2HPO4).

Mindkét vegyületet 100 ml vízben oldjuk.

Vér kenet vagy csontvelő festési eljárás

Két módja van: egy klasszikus és egy gyors.

Klasszikus mód

1. Fedjük le a kenetet 2 vagy 3 percig hígított May-Grünwald oldattal.
2. Mossuk pufferolt desztillált vízzel az előző megoldás megszüntetéséhez.
3. Fedjük le ugyanazon pufferolt mosóoldattal, és hagyjuk 1 percig hagyni. Az az elképzelés, hogy az előző festék a szerkezetekhez van rögzítve és ugyanakkor a sejtek hidratálódnak.
4. Adjunk hozzá 12 csepp hígított Giemsa tinktúrát a pufferelt vízre, és fújjuk össze és homogenizáljuk. Hagyjuk állni 15 vagy 20 percig.
5. Mossuk ki a kenetet pufferolt desztillált vízzel, és levegőn szárítsuk.
6. Fókuszáljunk és figyeljünk meg egy optikai mikroszkópban a 40X-es céllal festett vérsejteket. Szükség esetén a 100X használható.

Gyors mód

1. Fedjük le a kenetet május Grünwald festékkel, amelyet 1 percig hígítottunk.
2. Mossuk pufferolt desztillált vízzel.
3. Fedjük le pufferolt vízzel, és hagyjuk állni 1 percig.
4. Helyezze a hígított Giemsa festéket és hagyja 5 percig hagyni.
5. Mossuk pufferolt desztillált vízzel, és hagyjuk megszáradni.

Az itt leírt technikák iránymutató jellegűek, de figyelembe kell venni, hogy az eljárások és a színező idők a reagenseket szállító kereskedelmi ház szerint változnak. Javasoljuk, hogy kövesse az egyes kereskedelmi házak által szigorúan jelzett lépéseket.

Spermium folyadék kiterjesztett színező technika

1- 4 percig fedjük le az elterjedést egy May Grünwald-oldattal.

2- Vegye ki a festéket és mosson desztillált vízzel.

3 Helyezzünk egy hígított Giemsa-réteget (1:10) desztillált vízben 15 percig.

4- Vegye ki a festéket és mosson desztillált vízzel.

5- Hagyja száradni és figyelni a mikroszkóp alatt.

Fontos előírások

A technika szerint a reagenseknek és a mosóoldatoknak a pH-ját 7,2-7,3-ra kell beállítani, hogy a színezékek affinitása a sejtstruktúrákhoz ne torzuljon és nem változtatja meg a várható színt..

alkalmazások

Ezt a technikát a klinikai laboratóriumok használják a perifériás vér és a csontvelő, a szöveti szakaszok és a citológiák szennyeződésének festésére.

A hematológiai területen ez a technika létfontosságú a sejtek rendellenességeinek vizsgálatában, alakja, mérete és száma tekintetében. Ez egy nagyon értékes eszköz bizonyos betegségek, például leukémia és anaemia diagnosztizálására.

Emellett kiemelkedő hasznosságot nyújt a hematológiai mezőkben lévő paraziták keresésekor (Plasmodium sp és Trypanosoma cruzi) vagy szövettani (Leishmanias sp).

Vaginális citológia

Ami a hüvelyi citológiát illeti, ez a technika különösen előnyös a Trichomonas vaginalis. Ez fontos megállapítás, mivel jelenléte szimulálja a karcinóma képeket in situ ezután eltűnik, amikor a parazita megszűnik.

Spermiumminta

Ideális eszköz a sperma minták tanulmányozására, mivel értékes információkat szolgáltat a sperma minőségéről.

Az általuk kínált adatoknak főként számmal és morfológiával, valamint az egyidejűleg jelen lévő és létfontosságú sejtekkel kell rendelkezniük, mint például a csírasejtek, a leukociták és az epiteliális sejtek..

Ezzel az elemzéssel a fejben, a nyakban, a középső darabban és a fődarabban megfigyelt rendellenességek leírása lehetséges..

Emellett segíthetnek a hemospermia (vörösvérsejtek jelenléte a spermában) és a leucospermia vagy a pyospermia (a spermában a leukociták számának növekedése) esetén..

referenciák

1. Costamagna S, Prado M. A friss teszt, a május Grünwald-Giemsa és a Gram színek és a táptalajok validálása Trichomonas vaginalis. Parasitok. 2001; 25 (1-2): 60-64. Elérhető: scielo.
2. Merck KGaA laboratórium. Grünwald eozin mikroszkópiához metilén-kék.
3. - May-Grünwald-Giemsa folt. Wikipédia, A szabad enciklopédia. 2018. november 15., 14:37 UTC. 2019. január 8., 04:29: en.wikipedia.org
4. Laboratóriumi üveg vegyi anyagok. Reagensek szövettani technikákhoz, hematológiához és mikrobiológiához. Elérhető: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Javaslat a vérfoltok festésére a vérszámlálás olvasására. Nemzeti és Referencia Biomedicinális Laboratórium. Chilei Közegészségügyi Intézet.
6. Sarabia L. Spermiogram a WHO kritériumai szerint. A fejlesztés anatómiai és biológiai programja. Orvostudományi Kar Chilei Egyetem Elérhető a következő címen: pp.centramerica.com