Wright foltalapja, anyagai, technikája és felhasználása



az Wrigth foltja egy színező technika, amelyet James Homer Wright amerikai patológus 1902-ben készített a Romanowsky foltjából. Mivel Romanowsky foltja instabil volt, a Wrigth oldószerként és fixálószerként metanolt tartalmazott.

Ez a színezés polikromatikus, ami azt jelenti, hogy több színt generál a festék felszívódásától függően. Ezt a festési technikát széles körben alkalmazták a fehérvérsejtek számának differenciálására és a vörösvértestek, a vérlemezkék és a leukociták morfológiájának tanulmányozására a perifériás vérben és a csontvelőben..

Alkalmazása nagyon fontos, mivel a vér különböző sejtvonalaiban a rendellenességek láthatóak, elősegítve olyan betegségek diagnosztizálását, mint a leukémia vagy a bakteriális vagy parazita fertőzések..

Talán ezek a leggyakoribb alkalmazások, amelyekben ezt a technikát használják, de ezek nem az egyetlenek. A vér és a csontvelő kivételével más mintákban is hasznos, mint például az orrüreg, a széklet nyálka, a köpet, a bőr mintái..

index

  • 1 Wright foltjának alapítása
  • 2 Anyagok
    • 2.1 Előkészítés
    • 2.2. Pufferolt pufferoldat
    • 2.3 A színezés elvégzéséhez szükséges további anyagok
  • 3 Wright foltjának összetevői
    • 3.1 Metanol
    • 3.2 A lengéscsillapító
    • 3.3 Eozin (Y)
    • 3.4 Metilén kék
  • 4 Technika
  • 5 Segédprogram
    • 5.1 Hematológia
    • 5.2 Nazális szekréció
    • 5.3 Parazitológia
    • 5.4 Légzőszervi fertőzések
    • 5.5 Bakteriológia
    • 5.6 Mycology
  • 6 Hogyan figyelhető meg Wright foltjával a vérminták szerkezete??
  • 7 Javaslatok a jó festésre
  • 8 Gyakori hibák a Wrigth színezésben
    • 8.1 Nagyon halvány festés
    • 8.2 A színezék csapadékai
    • 8.3 A kenet rendkívül vöröses vagy kék színű
  • 9 Tárolási mód
  • 10 Referenciák

Wright foltalapja

Wright foltja a Romanowsky foltjától származik, amely egy savas festékből készült metil-alkohol (eozin Y) és egy bázikus (metilén-kék) és oxidációs termékeiből áll..

A Wright foltjában használt festékek keveréke a Romanowsky néven ismert hatást eredményezi, azaz gyönyörű lila színt ad a leukociták magjainak és a neutrofil granuláknak, míg a vörösvértestek rózsaszínűek..

A Wright foltjára jellemző színtartomány biztosításáért felelős komponensek kék B és eozin Y. A megfigyelt hatás a festékek kémiai szerkezeteihez való kötődésétől és a kék B és eozin Y kölcsönhatásától függ..

Savas szerkezetek, mint például a nukleinsavak, a nukleáris fehérjék és a reaktív éretlen citoplazma egyes sejttípusoknál, fix kék B (alapszín).

Míg a bázikus struktúrák, mint a hemoglobin, a szegmentált eozinofilek szemcséi, többek között a celluláris struktúrákban, rögzítik az eozin Y-t (savas festéket)..

A festés eredményét különböző tényezők befolyásolhatják, mint például a Wright festék pH-ja, a puffer és a mosóoldat; valamint a festési és rögzítési idő.

Ezért a reagensek előállításának minden egyes lépése döntő fontosságú, és minden részletet figyelembe kell venni.

anyagok

Wright színezés. 100 ml-re van szükség:

Mérjünk be 0,3 g Wright festéket, 97 ml metanolt és 3 ml glicerint mérünk.

előkészítés

Habarcsban helyezzük a nehéz mennyiségű Wright festéket, és lassan addig adjuk hozzá a glicerint, amíg a por teljesen fel nem oldódik..

Ezután hozzáadjuk a metanolt, összekeverjük és borostyán üvegbe öntjük.

Használat előtt az oldatot enyhe mozgásokkal és szűréssel kell rázni.

Pufferolt puffer

Egy liter desztillált vízben 3,76 g dinátrium-hidrofoszfátot (Na2MSZH4   2H20) plusz 2,1 g kálium-dihidrogén-foszfát (KH)2PO4).

Nagyon jól keverjük össze, amíg az összes beépített reagens fel nem oldódik. Állítsa be a pH-t 7,2-re. Öntsünk egy üvegedénybe és tartsuk szobahőmérsékleten.

A színezés elvégzéséhez szükséges további anyagok

Ezenkívül más anyagok is szükségesek a színező technika elvégzéséhez, ezek: tárgyakat hordozó lapok, tárgyak fedése, színezés hídja, vízzel vagy pufferrel ellátott pisetasok, stopperóra a színezőanyagok felvételéhez és néhány szárítóanyag (abszorbens papír, géz vagy pamut).

Wright folt komponensek

metanol

Az alkohol (metanol) rögzíti a vért a csúszkához.

Alapvetően redukáló reagens, dehidrátor és koaguláns rögzítőszer. Ezért funkciója a fehérjék koagulálása és oldhatatlanná tétele, de anélkül, hogy denaturálná őket.

A metanol a legszélesebb körben használt reagens, amely minden laboratóriumban rögzíti a kenetet, mivel jobb eredményeket biztosít, mint az etanol. Az ideális koncentráció 99%.

A lengéscsillapító

A puffer (pufferelt oldat) funkciója a színezék pH-jának beállítása vagy fenntartása, mivel a 7,2-re beállított pH-érték elengedhetetlen ahhoz, hogy a sejtstruktúrák megfelelően elnyeljék a festékeket.

Másrészt a metanol-rögzítés áthaladása dehidratálja a sejteket, és a puffer segít hidratálni őket.

Eosin (Y)

Az eozin affinitást mutat az alapvető komponensekhez, mert savas festék. Az eozin két típusa nagyon hasonlít egymásra, így a kettő közül bármelyik használható, ugyanazzal az eredménnyel.

Az egyik az eozin Y, a sárga eozin vagy a tetrabromofluoreszcein, a másik eozin B, a kékes eritrosin B vagy a dibromodinitrofluorescein. Azonban az eozin Y a leggyakrabban használt.

Ennek a festéknek a legfontosabb tulajdonsága a negatív polaritás, ami a pozitív töltéssel rendelkező sejtstruktúrák vonzódásához vezet.

Metilén kék

Ez az alapvető színezés. Fő tulajdonsága a metachromasia, vagyis nem minden struktúra lesz színezve ugyanolyan színben, attól függ, hogy milyen szerkezetű kémiai összetétele van a színezőnek.

Néhány fény vagy sötétkék, mások pedig sötét lila vagy halvány lila.

technika

1-Végezzük el a minta terjedését úgy, hogy egy vékony film maradjon, akár a csúszdán, akár a fedőlapon.

2-Hagyja körülbelül 2 órán keresztül száradni a levegőt.

3-Helyezze a száraz kenetet a festőhídra vagy a festő tálcára úgy, hogy a minta felfelé terjedjen.

4-Fedje le a lapot a Wright festékkel cseppenként, amíg a teljes felületet lefedi. Hagyjuk 5-8 percig hagyni.

5-A festéknek teljesen le kell fednie a csúszkát, anélkül, hogy a szélein kifolyna. Ha a színezés ideje alatt elkezd elpárologni, további cseppeket kell elhelyezni.

6-Ezután adjunk hozzá egyenlő mennyiségű lengéscsillapítót, fújjunk egy kicsit, amíg meg nem jelenik a jellemző fémes ragyogás. Vegyünk 10-15 percet.

7-Mosás csapvízzel, helyezze a puha fúvókát, amíg a lap rózsaszínre nem néz.

8 - Alkoholmal impregnált gézzel távolítsa el a csúszka hátoldalához rögzített festéket.

9-Hagyja a kenetet nagyon jól megszáradni, mielőtt elhelyezné az immerziós olajat a mikroszkópban való megjelenítéshez.

hasznosság

hematológia

Ideális a perifériás vérfoltok elkenődéséhez, a vastag vér kenet vizsgálatához és a csontvelőminták sejtjeinek tanulmányozásához.

A színezékek ezen kombinációjának kémiai tulajdonságai miatt a celluláris struktúrák könnyen felismerhetők, így képesek megkülönböztetni a jelenlévő különböző típusú sejteket.

Orrszekréció

Ez a technika nagyon hasznos az orrszekréció sejtjeinek (epiteliális sejtek, szegmentált eozinofilek, polimorfonukleáris) azonosítására az allergiás rhinitis diagnózisában..

parazitológiai

Ebben az értelemben hasznos volt a Leishmania sp a bőr alatti sejtszövet szövettani sejtjein belül. Hasonlóképpen, a leukociták székletmintákban (székletleucogram) történő azonosítására használják..

Ebben az esetben az orvos érdeklődésére számít, hogy a székletben található leukocitózis polimorfonukleáris vagy mononukleáris. Ez a megállapítás a székletleucogramban a bakteriális vagy vírusos fertőzésre vezethető vissza.

Másrészről a vérben keringő paraziták megtalálhatók a vörösvértestben vagy a plazmában szabadon. A kívánt paraziták Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii és az állatgyógyászatban hasznos, és hasznos Theileria equi és Babesia caballi, csecsemők okozta kórokozók, különösen a lófélékben.

Wright és Giemsa foltok megkülönböztethetik a hemoparazitákat a normál sejtkomponensektől. Ehhez kétféle terjedést használhat:

Finom szakaszok

A vért, mint egy vékony fóliát egy diara osztjuk. Wright foltjaival festett, feltárva a mag és a citoplazma jellemzőit.

Vastag csepp

Ezt a módszert használják a paraziták nagyobb mennyiségű vér jelenlétének vizsgálatára.

Ehhez egy nagy csepp vér kerül a lemezre. Ott ott kell defibrinálnod, hogy nagyobb és nagyobb köröket nyerjünk ki a központból kifelé, egy másik csúszka szélével.

Végül, a vastag kenetben a paraziták megfigyeléséhez, az eritrocitákat vízzel kell lizálni.

Légzőszervi fertőzések

Légzőszervi szinten ez a technika is hasznos, mivel a sputummintákban jelen lévő sejtek, a hörgő vagy bronchoalveoláris mosás fontosak a diagnózis megállapításához..

Ehhez hasonlóan polimorfonukleáris sejtek és mononukleáris sejtek is megkülönböztethetők.

bakteriológia

Ennek a technikának a bakteriológiában való alkalmazása korlátozott, mivel nem jó a baktériumok festésére, ezért a festéshez más speciális színező technikákat alkalmaznak..

Ugyanakkor azt alkalmazták, hogy epitheliális sejteket keressenek a Chlamydia trachomatis a húgycső vagy endocervikális nyálkahártya elszennyeződésében, bár el kell ismerni, hogy ez nem a legjobb \ t.

A vörösvérsejtek között is megfigyelhető a spirális típusú baktériumok Borrelia burgdorferi fertőzött betegekben, valamint a morulákban vagy a Ehrlichia sp a limfociták, monociták vagy neutrofilek citoplazmájában a vér kenetben.

mikológia

az Histoplasma capsulatum egy patogén gomba, amelyet gyakran különböző szövetminták mikroszkópos megfigyelésével diagnosztizálnak, Wright-féle festéssel festve.

Hogyan figyelhető meg Wright foltjával a vérminták szerkezete?

Ajánlások a jó festéshez

A vérminták kiterjesztését spontán módon levegőn kell szárítani. A festéknek a lehető legkevésbé vékonynak kell lennie ahhoz, hogy a festék jobban rögzüljön, és elkerülje a túlzsúfolódást.

Kiváló minőségű festéshez célszerű a festést a kenet előkészítését követő két órán belül elvégezni. Másrészt az ideális minta kapilláris vér, antikoaguláns nélkül.

Ha azonban vénás vért használnak, akkor EDTA antikoagulánsként, nem pedig heparinnak kell használni, mivel ez utóbbi deformálhatja a sejtstruktúrákat.

Az elszíneződés megelőzése érdekében az elkészített színezéket száraz helyen kell tárolni.

A mosás során ajánlott a semleges pH-ra beállított víz használata.

Végül ajánlatos a laboratóriumban használt festési módszereket olyan gyakran tesztelni.

Ez úgy történik, hogy a mintákat vagy a kiterjesztett mintákat minőségi ellenőrzésnek vetjük alá. Ez a lépés fontos, mivel ez biztosítja, hogy a festés megfelelően elkészüljön, és a színezési idők jól szabványosodnak.

Ha a minta lap rosszul színezett, akkor problémákat kell megoldani.

Gyakori hibák a Wrigth színezésben

Nagyon halvány festés

Nagyon sápadt kenet, általában nagyon rövid festési idő vagy nagyon túlzott mosás miatt. A festékkel való érintkezési idő meghosszabbításával vagy a mosási idő csökkentésével javítható.

A festék kicsapódik

A festékcsapok jelenléte a kenetben több oka lehet, azonban a leggyakoribb okok a következők: szűretlen festék használata, egyenetlen színhidak festése, piszkos lapok por vagy zsírral, nem jó mosás Végezze el a festést.

A kenet rendkívül vöröses vagy kék színű

A puffer a színezőanyag pH-jáért felelős. A jelzett (sav) alatti pH-értékű festékek nagyon vörös kenetet eredményeznek.

Ha a festék pH-ja meghaladja (lúgos), akkor rendkívül kékes kenet keletkezik.

Tárolási mód

A reagenst szobahőmérsékleten kell tárolni.

referenciák

  1. Gutiérrez V. Összehasonlító tanulmány a Wright festési módszer és az Elisa teszt között az Ehrlichiosis canina diagnosztizálására San Pedro Sula városában, Hondurasban. 2008. Diplomamunka az állatorvos doktorának megnevezéséhez. San Carlos de Guatemala Egyetem.
  2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas F. Alapvető festés a mikrobiológiai laboratóriumban. A fogyatékossággal kapcsolatos kutatás. 2014 3 (1): 10-18.
  3. - Wright foltja. Wikipédia, A szabad enciklopédia. 2018. május 18., 12:05 UTC. 2018. december 8., 20:37
  4. Calderón A, Cardona J, Vergara Ó. Gyakoriság: Babesia spp. a montería, Córdoba (Kolumbia) lovakban. Rev. udcaactual izgalmas.  2013 16 (2): 451-458.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Bailey & Scott mikrobiológiai diagnózisa. 12 ed. Argentínában. Panamericana S.A szerkesztő.
  6. Retamales E, Mazo V. Chilei Egészségügyi Intézet Kormánya. Javaslatok a vérfoltok festésére a vérszámláláshoz.