Ziehl-Neelsen Stain Alapítvány, Reagensek és Technika

az Ziehl-Neelsen folt színező technikában az alkohol-saválló mikroorganizmusok (AAR) azonosítására. Ennek a mikrobiológiai eljárásnak a neve a szerzőkre vonatkozik: Franz Ziehl bakteriológus és Friedrich Neelsen patológus.

Ez a technika egyfajta differenciál színezés, amely különböző színezékek használatát jelenti, hogy kontrasztot hozzon létre a megfigyelni kívánt, megkülönböztethető és később azonosítható struktúrák között. A Ziehl-Neelsen foltot bizonyos típusú mikroorganizmusok azonosítására használják.

Ezen mikroorganizmusok némelyike ​​mikobaktérium (például, Mycobacterium tuberculosis), nocardias (például, Nocardia sp.) és néhány egysejtű paraziták (például, Cryptosporidium parvum). A baktériumok közül sok a szokásos, Gram-foltnak nevezett módszerrel osztályozható.

Egyes baktériumcsoportok azonban más módszereket igényelnek az azonosításukhoz. Az olyan technikák, mint a Ziehl-Neelsen festés, a színezékeket hővel kombinálják, hogy az elsőt a sejtfalhoz rögzítsék.

Ezután jön egy elszíneződési folyamat, amely lehetővé teszi a két eredményt: ellenállást vagy érzékenységet a savakkal és alkoholokkal szemben.

index

• 1 Alapítvány
  • 1.1 Másodlagos színezés
• 2 Reagens
  • 2.1 Elsődleges színezés
  • 2.2 Elszíneződő oldat
  • 2.3 Másodlagos színezés (színtelenítő)
• 3 Technika
  • 3.1 Savas festés
• 4 Referenciák

alapítvány

Ennek a festési technikának az alapja ezen mikroorganizmusok sejtfal tulajdonságain alapul. A falat olyan típusú zsírsavak képezik, amelyeket mikolsavaknak neveznek; Ezeket nagyon hosszú láncok jellemzik.

Amikor a zsírsavak nagyon hosszú szerkezetűek, könnyebben megtarthatják a színezékeket. A sejtfal nagy mikolsavtartalmának köszönhetően a baktériumok egyes nemzetségei nagyon nehezen festhetők Gram festéssel.

A Ziehl-Neelsen foltban a fenolos karbol-fukszint, egy alapfestéket használjuk. Ez képes kölcsönhatásba lépni a sejtfal zsírsavjával, amely szobahőmérsékleten viaszos.

A Carbol fuchsin festést hő jelenlétében javítják, mert a viasz elolvad, és a festékmolekulák gyorsabban mozognak a sejtfalba.

A később felhasznált sav arra szolgál, hogy elszíneződjön a nem festett sejtek, mivel a faluk nem volt elégséges kapcsolatban a színezőanyaggal; ezért a savas színezékképző anyag szilárdsága képes eltávolítani a savas festéket. Az ilyen elszíneződést ellenálló sejteket savállónak nevezik.

Másodlagos színezés

A minta elszíneződése után ez ellentétes a másik másodlagos festékkel. Általában metilénkék vagy malachit zöld.

A másodlagos festék a háttéranyagot megfestette, és ennek következtében kontrasztot képez az első lépésben festett szerkezetekkel. Kizárólag az elszíneződött sejtek elnyelik a második festéket (anti-foltot) és színüket, míg a saválló sejtek megtartják a piros színt.

Ezt az eljárást gyakran használják a Mycobacterium tuberculosis és Mycobacterium leprae, savak gyors bacillusnak nevezik.

reagensek

Elsődleges színezés

Karboxin 0,3% fuchszint (szűrt) használunk. Ezt a festéket alkoholok: fenol (90%) vagy metanol (95%) elegyéből állítjuk elő, és ebben a keverékben 3 g bázikus fukszint oldunk..

Elszíneződő oldat

Ebben a lépésben 3% -os alkoholos vagy 25% -os kénsavoldatot használhat.

Másodlagos színezés (színtelenítő)

A minták kontrasztjának leggyakrabban használt festéke általában 0,3% metilén-kék. Azonban mások is használhatók, például 0,5% malachit zöld.

technika

Savas gyors festési eljárás

Készítsünk baktérium kenetet

Ezt a készítményt tiszta és száraz tárgylemezen, sterilitási óvintézkedések után készítik.

A kenet kiszárítása

Hagyja a kenetet szobahőmérsékleten megszáradni.

Melegítsük a mintát

A mintát úgy kell felmelegíteni, hogy az alábbi tárgylemezre tűz van. Az alkohollal való rögzítés akkor történhet meg, ha a kenetet nem köpte össze (nátrium-hipoklorittal kezelve, hogy fehérítse), és ha nem fog azonnal festeni..

M. tuberculosis Fehérítőszerrel és a festési folyamat során eliminálódik. A kezeletlen köpet nem éri el M. tuberculosis, mivel az alkoholhoz való rögzítés baktericid.

Fedjük le a foltot

A foltot karbol fukszinnal fedjük le (elsődleges alapfolt).

Melegítse a foltot

Ez 5 percig történik. Figyeljen a gőzkibocsátásra (kb. 60 ° C). Fontos, hogy ne kerüljön túlmelegedés, és ne kerüljön a mintába.

A foltok fűtését illetően nagy figyelmet kell fordítani a fuchsin karbol fűtésére, különösen akkor, ha a festést olyan tálcán vagy más tartályon végezzük, amelyen a korábbi foltokból gyúlékony vegyszereket gyűjtöttek..

Csak kis lángot kell felhordani a tárgylemezek alatt, egy pár csepp savval, metanollal vagy 70% -os etanollal megnedvesített megvilágított tamponnal. Kerülje az etanolban átitatott nagy tampont, mert ez tűzveszélyt okoz.

Mossa le a foltot

Ezt a mosást tiszta vízzel kell elvégezni. Ha a csapvíz nem tiszta, mossa le a kenetet szűrt vagy desztillált vízzel, lehetőleg.

Fedjük le a kenetet savas alkohollal

Ennek a savalkoholnak 3% -osnak kell lennie. A lefedettséget 5 percig végezzük, vagy addig, amíg a kenet elszíneződött, vagyis halvány rózsaszín.

Figyelembe kell venni, hogy a savalkohol gyúlékony; ezért nagyon óvatosan kell használni. Kerülje a gyújtóforrások közelében.

Mossa le a foltot

A mosás tiszta, desztillált vízzel történik.

Fedjük le a kenetet festékkel

Lehet, hogy zöld malachit (0,5%) vagy metilén-kék (0,3%) festék 1 vagy 2 percig, a leghosszabb ideig, ha a kenet elszíneződik..

Mossa le a foltot

A tiszta vizet újra kell használni (desztillált).

csatorna

A csúszka hátulját meg kell tisztítani, és a foltot egy vízelvezető polcra kell helyezni, hogy levegőn száradjon (ne használjon szárító anyagot).

Vizsgálja meg a mikroszkópban a kenetet

A 100X célt és a merülőolajat kell használni. Szisztematikusan vizsgálja meg a kenetet, és írja le a vonatkozó észrevételeket.

Az eredmények értelmezése

Elméletileg a vöröses színnel festett mikroorganizmusok sav-gyors pozitívnak tekinthetők (AAR +).

Ellenkezőleg, ha a mikroorganizmusokat kék vagy zöld színnel festik, az ellenfestékként használt festéktől függően, azok negatív alkohol-rezisztens savnak (AAR-) tekinthetők..

referenciák

1. Apurba, S. & Sandhya, B. (2016). A gyakorlati mikrobiológia alapjai (1. kiadás). Jaypee Brothers orvosi kiadók.
2. Bauman, R. (2014). Mikrobiológia betegségekkel testrendszerrel (4. kiadás). Pearson Education, Inc..
3. Heritage, J., Evans, E. & Killington, A. (1996). Bevezető mikrobiológia (1. kiadás). Cambridge University Press.
4. Morello, J., Granato, P. Wilson, M. & Morton, V. (2006). Laboratóriumi kézikönyv és a mikrobiológiai munkafüzet: Alkalmazások a betegellátásban (11. kiadás). McGraw-Hill oktatás.
5. Vasanthakumari, R. (2007). Mikrobiológiai tankönyv (1. kiadás). B.I. Kiadványok PVT.